Основы сайтов и иерархий — Configuration Manager

Twitter LinkedIn Facebook Адрес электронной почты

• Статья
• 10/05/2022
• Чтение занимает 3 мин

Относится к Configuration Manager (Current Branch)

Развертывание Configuration Manager должно быть установлено в домене Active Directory. Основой этого развертывания является один или Configuration Manager сайтов, которые образуют иерархию сайтов. От одного сайта к многосайтовой иерархии тип и расположение устанавливаемого сайта позволяют при необходимости увеличивать (расширять) развертывание и доставлять ключевые службы управляемым пользователям и устройствам.

Иерархии сайтов

При первой Configuration Manager первый сайт Configuration Manager определяет область иерархии. Первый сайт Configuration Manager — это основа, с которой вы будете управлять устройствами и пользователями на предприятии. Первый сайт должен быть сайтом центра администрирования или автономным первичным сайтом.

Сайт центра администрирования подходит для крупномасштабных развертываний, предоставляет центр администрирования и обеспечивает гибкость поддержки устройств, распределенных по глобальной сетевой инфраструктуре. После установки сайта центра администрирования необходимо установить один или несколько первичных сайтов в качестве дочерних сайтов.

Такая конфигурация необходима, так как сайт центра администрирования не поддерживает непосредственное управление устройствами, которое является функцией первичного сайта. Сайт центра администрирования поддерживает несколько дочерних первичных сайтов. Дочерние первичные сайты используются для непосредственного управления устройствами и управления пропускной способностью сети, когда управляемые устройства находятся в разных географических расположениях.

Автономный первичный сайт подходит для небольших развертываний и может использоваться для управления устройствами без установки дополнительных сайтов. Хотя автономный первичный сайт может ограничить размер развертывания, он поддерживает сценарий расширения иерархии позже путем установки нового сайта центра администрирования. В этом сценарии расширения сайта автономный первичный сайт становится дочерним первичным сайтом, а затем можно установить дополнительные дочерние первичные сайты под новым сайтом центра администрирования.

Затем можно развернуть начальное развертывание для будущего роста предприятия.

Совет

Автономный первичный сайт и дочерний первичный сайт — это один и тот же тип сайта: первичный сайт. Разница в имени основана на связи иерархии, которая создается при использовании сайта центра администрирования. Эта связь иерархии также может ограничивать установку определенных ролей системы сайта, которые расширяют Configuration Manager функциональности. Это ограничение ролей связано с тем, что определенные роли системы сайта могут быть установлены только на сайте верхнего уровня иерархии, сайте центра администрирования или автономном первичном сайте.

После установки первого сайта можно установить дополнительные сайты. Если первый сайт был сайтом центра администрирования, можно установить один или несколько дочерних первичных сайтов. После установки первичного сайта (автономного или дочернего первичного) можно установить один или несколько вторичных сайтов.

Вторичный сайт можно установить только как дочерний сайт под первичным сайтом. Этот тип сайта расширяет доступ к первичному сайту для управления устройствами в расположениях с медленным сетевым подключением к первичному сайту. Хотя вторичный сайт расширяет первичный сайт, первичный сайт управляет всеми клиентами. Вторичный сайт обеспечивает поддержку устройств в удаленном расположении. Он обеспечивает поддержку путем сжатия, а затем управления передачей данных по сети, отправляемой (развертыванию) клиентам, а также отправки клиентами обратно на сайт.

На следующих схемах показаны некоторые примеры макетов сайтов.

Дополнительную информацию см. в следующих статьях:

• Введение в Configuration Manager

• Разработка иерархии сайтов для Configuration Manager

• Установка Configuration Manager сайтов

Серверы системы сайта и роли системы сайта

Каждый Configuration Manager сайта устанавливает роли системы сайта, поддерживающие операции управления. При установке сайта по умолчанию устанавливаются следующие роли:

• Роль сервера сайта назначается компьютеру, на котором устанавливается сайт.

• Роль сервера базы данных сайта назначается SQL Server, на котором размещена база данных сайта.

Другие роли системы сайта являются необязательными и используются только в том случае, если требуется использовать функции, активные в роли системы сайта. Любой компьютер, на котором размещена роль системы сайта, называется сервером системы сайта.

Для меньшего развертывания Configuration Manager изначально можно запустить все роли системы сайта непосредственно на компьютере сервера сайта. Затем, по мере роста управляемой среды и потребностей, можно установить дополнительные серверы системы сайта для размещения дополнительных ролей системы сайта, чтобы повысить эффективность сайта при предоставлении служб для большего объема устройств.

Сведения о различных ролях системы сайта см. в разделе «Планирование серверов системы сайта» и «Роли системы сайта для Configuration Manager».

Публикация сведений о сайте в доменные службы Active Directory

Чтобы упростить управление Configuration Manager, можно расширить схему Active Directory для поддержки сведений, используемых Configuration Manager, а затем на сайтах опубликовать свои ключевые сведения в доменные службы Active Directory (AD DS).

Затем компьютеры, которыми вы хотите управлять, могут безопасно получать сведения, связанные с сайтом, из надежного источника AD DS. Клиенты с информацией могут получить идентификаторы доступных сайтов, серверов системы сайта и служб, которые предоставляют эти серверы системы сайта.

Расширение схемы Active Directory выполняется только один раз для каждого леса и может быть выполнено до или после установки Configuration Manager. При расширении схемы необходимо создать новый контейнер Active Directory с именем System Management в каждом домене. Контейнер содержит сайт Configuration Manager, который будет публиковать данные для поиска клиентами. Дополнительные сведения см . в разделе «Подготовка Active Directory к публикации сайта».

Публикация данных сайта повышает безопасность иерархии Configuration Manager снижает административные издержки, но не требуется для базовых Configuration Manager функциональности.

Основы редактирования сайта—ArcGIS Hub | Документация

После того, как вы создали сайт или инициативу, вы можете использовать редактор сайта и его боковую панель для настройки сайта, разработки его компоновки и добавления страниц.

В этом разделе вы узнаете, как сделать следующее:

• Запустить сессию редактирования в редакторе сайт, сохранить работу и просмотреть изменения.
• Использовать строки и карточки для разработки сайта или компоновки страницы.
• Установить цвета фона, цвета текста и шрифты.
• Настроить заголовок и колонтитул.

Открытие сайта в режиме редактирования

Чтобы начать, откройте сайт в режиме редактирования. Подробнее об открытии страницы в режиме редактирования см. в Открыть страницу в режиме редактирования.

Из окна браузера

Чтобы открыть сайт в режиме редактирования из браузера, выполните следующие шаги:

1. Откройте URL сайта в новом окне браузера и щелкните Войти на глобальной навигационной панели.
2. Щелкните кнопку редактирования , чтобы открыть редактор сайтов.

Из ArcGIS Hub

Если глобальная навигация отключена для сайта, вы можете открыть сайт из ArcGIS Hub:

1. Войдите в ArcGIS Hub на hub. arcgis.com.
2. На странице Обзор щелкните Управлять в Cайты или Инициативы.
3. Щелкните на названии сайта или инициативы, чтобы открыть редактор сайта.

Из ArcGIS Online

Чтобы открыть сайт в режиме редактирования из ArcGIS Online, выполните следующие действия:

1. Войдите в ArcGIS Online.
2. Найдите сайт или сайт инициативы элемента Hub Site Application в разделе Ресурсы.
3. Щелкните элемент, чтобы открыть Информацию об элементе и щелкните Настроить приложение.

Сохранение изменений

Так как вы редактируете сайт, регулярно сохраняйте изменения. Кнопка Сохранить находится в верхнем правом углу панели навигации редактирования. У вас есть возможность опубликовать сайт как черновик для просмотра для других пользователей. Более подробно см. раздел Публикация сайтов или страниц.

Если участники основной команды редактируют сайт одновременно или сайт открыт на нескольких вкладках, применяются изменения, сделанные последним пользователем, выполнившим сохранение и выход. Открытые вкладки не обновляются автоматически для отображения новых изменения, поэтому рекомендуется, чтобы одновременно только один участник основной команды редактировал сайт.

Операции на боковой панели и панель навигации редактирования

Чтобы получить больше возможностей редактирования сайта, вы будете использовать боковую панель сайта. Эта панель включает меню Настройки, Заголовок, Тема, Компоновка и Колонтитул.

Чтобы открыть боковую панель, щелкните на кнопку переключения боковой панели . Щелкните на кнопку Назад рядом с Настроить наверху панели, чтобы вернуться к главному меню.

Редактор сайта также включает панель навигации редактирования вверху редактора компоновки, что дает вам доступ к дополнительным функциям, таким как команды, обратная связь и библиотека ресурсов. Вы также можете сохранить сайт и получить доступ к странице информации об элементе в ArcGIS Online из этой панели. Щелкните кнопку дополнительной информации и выберите Редактировать в ArcGIS Online.

Создание компоновки сайта

Чтобы начать создание компоновки своего сайта, откройте меню Компоновка на боковой панели, чтобы работать с выборкой карточек для добавления на сайт изображений, текста, приложений, медиафайлов и другого содержания.

Компоновка сайта по умолчанию создана, чтобы показать вам, как можно комбинировать карточки для создания единого целого, что сфокусирует внимание на предоставлении ресурсов, перед тем, как вы представите свои ресурсы. Вы можете принять этот формат как есть, изменить его цвета и содержимое или вы можете удалить все карточки и начать с пустой компоновки.

Чтобы познакомиться с редактированием компоновки сайта, выполните эти три шага и добавьте новую карточку строки:

1. Щёлкните Компоновка на боковой панели.
2. Перетащите карточку Строка с боковой панели на компоновку и расположите строку там, где вы хотите.
3. Перетащите карточку, например текстовую карточку, из боковой панели в новую строку и расположите карточку там, где вы хотите.
4. Дополнительно, чтобы переместить строку, удерживайте курсор над верхним правым углом строки и используйте кнопку размещения , чтобы переместить строку.

   Вы можете переместить строку, включая все карточки, которые она содержит, в новое место на компоновке.

5. Щелкните Сохранить.
6. Чтобы удалить карточку или строку, щелкните ее кнопку удаления .

Настройки сайта

У каждого сайта есть свои настройки, позволяющие управлять такими элементами, как конфигурация URL , краткая информация о сайте и его название, а также такие действия, как частные загрузки и глобальная навигация.

Подсказка:

URL адрес — это важная настройка вашего сайта и ее надо настроить заранее. Чтобы настроить URL-адрес с пользовательским доменом или чтобы переименовать сайт, см. настройка URL-адреса сайта.

Более подробно см. Настройка параметров сайта

Заголовки, нижние колонтитулы и глобальная навигация

Заголовок и нижний колонтитул — важные элементы компоновки вашего сайта. В заголовке вы можете представить свой сайт, добавив оформление бренда и создав меню, которое поможет вашим посетителям найти ресурсы, страницы и внешние вебсайты. Колонтитул обозначает конец сайта и предоставляет пространство для полезной информации, например информация об авторских правах вашей организации, местоположение и контактная информация.

Дополнительно во всех новых сайтах включена глобальная навигация, набор возможностей в виде узкой, компактной панели над заголовком. Эта панель позволяет посетителям найти ресурсы сайта по ключевым словам и фразам, получить доступ к своему профилю пользователя и просмотреть уведомления.

На небольших устройствах, таких как мобильный телефон, заголовок сворачивается в ниспадающее меню, и элементы глобальной навигации (включая опцию ArcGIS Hub Premium добавления инициативы в избранное) доступны на боковой панели, так что посетители могут перемещаться по сайту независимо от размера экрана.

Заголовок, колонтитул и панель глобальной навигации остаются неизменными на сайте и его страницах, чтобы гарантировать, что посетители могут перейти обратно к исходной странице при переходе во ссылкам на другие страницы.

Можно воспользоваться пользовательским кодом в заголовках и колонтитулах. Вы также можете использовать опции в меню Заголовок на боковой панели, чтобы настроить следующее (написание кода не требуется):

• Логотип
• Цвет фона заголовка и текста
• Иконки социальных сетей, чтобы связать посетителей с платформами социальных сетей
• Ссылки меню на страницы и дополнительные ресурсы для создания навигации сайта

Для получения дополнительной информации см. Бренд сайта с заголовком и опциями темы и Настройка глобальной навигации и ссылок меню.

Цвета и шрифты

Вы можете задать цвета для заголовка, панели глобальной навигации, кнопок, текста и цвета фона с помощью меню Тема на боковой панели. Выбранные цвета и панели применяются к компоновке сайта и всем вложенным в сайт страницам.

Вы можете заместить цвета темы для отдельных строк, чтобы обеспечить больший контроль за цветами компоновки. У каждой строки есть собственные настройки, которые позволяют вам задавать цвета текста и фона, так же как и применять изображение в качестве фона.

Сначала поместите курсор над правым верхним углом строки и щелкните кнопку настроек для изменения следующих возможностей.

• Выберите широкую или квадратную компоновку — Широкая раскрывает строки через всю компоновку. Квадратная отображает ресурсы с зафиксированной шириной в строке.

  Подсказка:

  Квадратная — это рекомендуемая настройка для публикации сайтов, предназначенных для просмотра преимущественно на мобильных устройствах.

• Измените цвет текста и фона с помощью шестизначных кодов цвета или бегунка цвета — Любой цвет отображается в строке таким, каким вы его задали в этой настройке. Это включая текст, отображаемый в строке с помощью любой карточки Вы можете также применить цвет к фону строки.

  Подсказка:

  Убедитесь, что цветовой контраст между цветом текста строки и цветом фона удовлетворяет критерию доступности 4. 5:1 для обычного текста и 3:1 для крупного текста или символа. Существует много вебсайтов, где вы можете проверить цветовойконтраст, например WebAIM.

• Задать фоновое изображение — Вы можете дополнительно установить изображение в качестве фона для строки, загрузив изображение или вставив ссылку на размещенный файл изображения.

  Подсказка:

  При использовании изображения фона выберите изображение с простым шаблоном или темой, особенно если вы планируете наложить текст или другое содержимое.

Более подробно о форматировании строк см. в Добавление текста и изображений и Создание темы.

Страницы

Страница — дополнительная веб-страница , которую можно добавить на сайт, адаптирующая заголовок, колонтитул и пользовательский домен сайта. Вы можете добавить ссылку на дополнительные страницы, используя ссылки меню в заголовке.

Если вы планируете охватить область информации или отобразить несколько элементов с помощью iframes и карточки карты (вебкарты и вебсцены), рассмотрите использование страниц для разделения содержимого по теме. Это поможет сохранить загрузку и производительность вашего сайта и даст посетителям сайта возможность изучать содержание в своем собственном темпе.

Каждая страница, добавленная на сайт, содержит боковую панель с таким же меню Компоновка, включенным в боковую панель. Это означает, что вы можете создать компоновку своей страницы с помощью карточек так же, как вы разрабатывали сайт.

Для подробной информации о страницах см. Добавление страниц на ваш сайт.

---

Отзыв по этому разделу?

Основа сильного визуала сайта (с примерами) — The12.Studio на vc.ru

Навскидку, можете ли вы прямо сейчас назвать хотя бы один бренд или компанию с сильным брендингом? Чем вам запомнился ее сайт? Удалось ли вам легко найти то, что искали? Соответствовала ли информация на сайте вашему запросу? Вы должны понимать, что у разных сайтов разные цели. Рассказать клиентам, о чем ваш продукт или услуга – одна из самых распространенных целей. Это даже важнее, чем ваша визитка. Но просто иметь сайт недостаточно, важно подумать о брендинге. Сделать просто красивый сайт, конечно, хорошо, но сайты с выдающимся брендингом и отчетливым имиджем бренда являются результатом: продуманного планирования, креативности, внимательности к вашим потенциальным клиентам.

36 просмотров

Собираетесь ли вы создать новый веб-сайт для своего стартапа или изменить дизайн существующего, мы составили для вас руководство по брендингу сайта и его основным компонентам.

По сути, сильный брендинг сайта влияет на все аспекты вашего бизнеса, включая узнаваемость бренда, продажи, маркетинг и удовлетворенность клиентов. Когда вы планируете разработать сильный фирменный стиль для вашей компании, обратите внимание на следующие основные моменты и примеры, которые могут вас вдохновить.

1. ЧЕТКАЯ ЦЕЛЬ

В идеале цель и назначение вашего сайта должны быть ясны с самого начала. Задайте себе следующие вопросы, прежде чем сесть и заняться улучшением брендинга:

— Зачем нам сайт?

— Что будет отличать наш сайт от конкурентов?

— Что мы хотим, чтобы наша аудитория делала, когда они посещают наш сайт?

— Кто наша целевая аудитория? Каково их поведение в сети?

Вот несколько примеров целей:

— Отвечать на часто задаваемые вопросы от потенциальных клиентов и позиционировать продукт или услугу как решение этих вопросов.

— Привлекать потенциальных клиентов.

— Собирать адреса электронной почты, которые мы можем использовать для создания онлайн-сообщества.

— Демонстрировать отзывы клиентов.

— Делиться обновлениями продуктов и объявлениями компании.

https://www.chestniydvor.ru 

Цели сайта ясны с того момента, как вы заходите на домашнюю страницу. Вы сразу узнаете, что компания делает, и легко сможете отыскать продукты в зависимости от ваших предпочтений, бюджета и необходимости.

2. ПРОДУМАННАЯ ВЕРСТКА И СТРУКТУРА САЙТА

Вот стандартные страницы, которые следует включить при планировании макета:

— Домашняя страница. Она должна сообщать о том, что вы делаете, кто вы и как ваш продукт или услуга могут помочь.

— О компании – расскажите историю вашего бренда и о людях, стоящих за ним.

— Страницы продуктов или услуг. Создайте отдельные страницы для каждого продукта или услуги, которые вы предлагаете.

— Местоположение (если у вас есть физический магазин или офис) – у посетителей веб-сайта не должно возникнуть проблем с поиском вашего магазина. Вы можете добавить карту на эту страницу.

— Страница часто задаваемых вопросов. Помимо ответов на часто задаваемые вопросы клиентов, страница часто задаваемых вопросов экономит время для вашей службы поддержки.

— Контакты. Помимо ваших контактных данных, вы можете добавить сюда свои социальные сети.

https://www.bsstyle.ru

https://www.bsstyle.ru

Взгляните на структуру и компоненты сайта выше.

3. ЦЕННЫЕ ВИЗУАЛЬНЫЕ ЭЛЕМЕНТЫ

Как упоминалось ранее, сильный брендинг сайта помогает повысить узнаваемость бренда. Вы легко узнаете Nike, Coca-Cola или Netflix, просто взглянув на их логотип, верно? Нужно стремиться к такому же эффекту, когда речь идет о графике вашего сайта и маркетинговых материалах. К ним относятся визуальные ресурсы – логотип, инфографика, видео и высококачественные фотографии. Ваши визуальные ресурсы представляют ваш бренд. Они должны быть в состоянии передать сообщение вашего бренда, не говоря ни слова.

https://www.shmel.tech

Визуальное содержимое сайта намеренно создано для бренда и является уникальным, отражающим бренд и вовлекающим клиентов.

4. СТРАТЕГИЧЕСКОЕ СОДЕРЖАНИЕ

Стратегический контент, как следует из названия, — это контент, соответствующий вашим бизнес-целям. К ним относятся видео для PR-статей, сообщения в блогах и другое. Основной способ создания и разработки стратегического контента для вашего сайта – понять потребности и предпочтения посетителей в отношении контента. Кроме того, не создавайте контент без учета того, как он впишется в общую бизнес-цель. Например, если вы хотите привлечь внимание генеральных директоров и других ключевых лиц, принимающих решения в организации, создайте контент, ориентированный на лидерство, который предлагает им основы, помогающие им принимать более обоснованные решения. Большую часть времени этот тип аудитории не интересуется тактикой или практическими шагами, поскольку этот тип контента больше находит отклик у менеджеров среднего звена. Хорошо продуманный контент помогает укрепить и выделить ваш бренд, а также гарантирует, что он действительно найдет отклик у аудитории.

Помимо симпатичных анимаций на главной странице, команда Toggl отлично справляется с разработкой стратегического контента. Они организовали свой контент для каждого сегмента посетителей сайта.

https://toggl.com/

5. ТЩАТЕЛЬНО ПРОДУМАННОЕ СОЧЕТАНИЕ ЦВЕТОВ
Человеку свойственно связывать определенный цвет с настроением и чувством. Каждый цвет, который посетители сайта увидят на вашем сайте, вызовет определенный эмоциональный отклик. По этой причине невероятно важно выбрать правильную цветовую комбинацию, которая даст вашей аудитории представление о вашем бренде.

https://kristallmin.tilda.ws/

Взгляните на цвета – они отражают тематику сайта.

6. ОТЛИЧНЫЙ ПОЛЬЗОВАТЕЛЬСКИЙ ИНТЕРФЕЙС

Отличный пользовательский опыт звучит избито, но нет лучшего способа описать беспроблемное взаимодействие, которое испытывает посетитель сайта, попав на него. Персонализация веб -сайта – это пример передовой практики UX, которую могут попробовать бренды из разных отраслей. Например, как только они попадут на ваш веб-сайт, интуитивно понятные рекомендации по продуктам заставят их почувствовать, что ваш веб-сайт создан специально для их нужд и предпочтений.

https://dostroy.info/

7. СОГЛАСОВАННОСТЬ

Если в дизайне вашего веб-сайта отсутствует последовательность, привлекательные визуальные эффекты, полезный контент, убедительный текст и отличный пользовательский интерфейс не будут иметь большого значения. Например, на главной странице есть нижний колонтитул, а на остальных страницах сайта его нет. Непоследовательность в вашем брендинге, может негативно повлиять на надежность вашего бренда и его способность превращать бывших клиентов в лояльных сторонников бренда. Потенциальные оплошности в брендинге можно предотвратить с помощью руководств по стилю, в которых изложены принципы вашего бренда.

https://www.the12.studio/

P. S. Все примеры (кроме пункта 4) – работы дизайнеров нашей студии.

Брендинг, Shopify дизайн и разработка брендов электронной коммерции

Перейти к содержимому

Услуги

• Фирменный стиль
• Shopify Дизайн + разработка
• Направление фотографии
• Творческие активы

Пастбищная птица

SHOPIFY ДИЗАЙН + РАЗРАБОТКА

НАПРАВЛЕНИЕ ФОТОГРАФИИ

КОПИРАЙТ

ПРОСМОТР →

Эй, знатоки!

Shopify Дизайн + Разработка

ПРОСМОТР →

Торговая компания St.

Jam Co.

SHOPIFY ДИЗАЙН + РАЗРАБОТКА

ПРОСМОТР →

Power Up Foods

SHOPIFY ДИЗАЙН + РАЗРАБОТКА

НАПРАВЛЕНИЕ ФОТОГРАФИИ

ПРОСМОТР →

Изначально чистый

ИДЕНТИЧНОСТЬ БРЕНДА

SHOPIFY ДИЗАЙН + РАЗРАБОТКА

НАПРАВЛЕНИЕ ФОТОГРАФИИ

ТВОРЧЕСКИЕ АКТИВЫ

ПРОСМОТР →

Основные ткани

ИДЕНТИЧНОСТЬ БРЕНДА

SHOPIFY ДИЗАЙН + РАЗРАБОТКА

НАПРАВЛЕНИЕ ФОТОГРАФИИ

ТВОРЧЕСКИЕ АКТИВЫ

ПРОСМОТР →

Вертикальный выступ

SHOPIFY ДИЗАЙН + РАЗРАБОТКА

ПРОСМОТР →

Коко

SHOPIFY ДИЗАЙН + РАЗРАБОТКА

ТВОРЧЕСКИЕ АКТИВЫ

ПРОСМОТР →

Toups & Co Organics

ИДЕНТИЧНОСТЬ БРЕНДА

SHOPIFY ДИЗАЙН + РАЗРАБОТКА

НАПРАВЛЕНИЕ ФОТОГРАФИИ

ТВОРЧЕСКИЕ АКТИВЫ

ПРОСМОТР →

Кофе Савориста

SHOPIFY ДИЗАЙН + РАЗРАБОТКА

НАПРАВЛЕНИЕ ФОТОГРАФИИ

ПРОСМОТР →

Отходы

ИДЕНТИЧНОСТЬ БРЕНДА

SHOPIFY ДИЗАЙН + РАЗРАБОТКА

НАПРАВЛЕНИЕ ФОТОГРАФИИ

ТВОРЧЕСКИЕ АКТИВЫ

ПРОСМОТР →

Товары для кожи Отто

ИДЕНТИЧНОСТЬ БРЕНДА

SHOPIFY ДИЗАЙН + РАЗРАБОТКА

НАПРАВЛЕНИЕ ФОТОГРАФИИ

ТВОРЧЕСКИЕ АКТИВЫ

ПРОСМОТР →

Стержень для ногтей W

ИДЕНТИЧНОСТЬ БРЕНДА

SHOPIFY ДИЗАЙН + РАЗРАБОТКА

НАПРАВЛЕНИЕ ФОТОГРАФИИ

ТВОРЧЕСКИЕ АКТИВЫ

ПРОСМОТР →

Тетя Флоу

SHOPIFY ДИЗАЙН + РАЗРАБОТКА

WordPress ДИЗАЙН + РАЗРАБОТКА

НАПРАВЛЕНИЕ ФОТОГРАФИИ

ТВОРЧЕСКИЕ АКТИВЫ

ПРОСМОТР →

Любовь + будь здоров

ДИЗАЙН САЙТА + РАЗРАБОТКА

ПРОСМОТР →

Пастбищная птица

SHOPIFY ДИЗАЙН + РАЗРАБОТКА

НАПРАВЛЕНИЕ ФОТОГРАФИИ

КОПИРАЙТ

Эй, знатоки!

Shopify Дизайн + Разработка

Торговая компания St.

Jam Co.

SHOPIFY ДИЗАЙН + РАЗРАБОТКА

Power Up Foods

SHOPIFY ДИЗАЙН + РАЗРАБОТКА

НАПРАВЛЕНИЕ ФОТОГРАФИИ

Первозданно чистый

ИДЕНТИЧНОСТЬ БРЕНДА

SHOPIFY ДИЗАЙН + РАЗРАБОТКА

НАПРАВЛЕНИЕ ФОТОГРАФИИ

ТВОРЧЕСКИЕ АКТИВЫ

Основные ткани

ИДЕНТИЧНОСТЬ БРЕНДА

SHOPIFY ДИЗАЙН + РАЗРАБОТКА

НАПРАВЛЕНИЕ ФОТОГРАФИИ

ТВОРЧЕСКИЕ АКТИВЫ

Вертикальный выступ

SHOPIFY ДИЗАЙН + РАЗРАБОТКА

Коко

SHOPIFY ДИЗАЙН + РАЗРАБОТКА

ТВОРЧЕСКИЕ АКТИВЫ

Toups & Co Organics

ИДЕНТИЧНОСТЬ БРЕНДА

SHOPIFY ДИЗАЙН + РАЗРАБОТКА

НАПРАВЛЕНИЕ ФОТОГРАФИИ

ТВОРЧЕСКИЕ АКТИВЫ

Кофе Савориста

SHOPIFY ДИЗАЙН + РАЗРАБОТКА

НАПРАВЛЕНИЕ ФОТОГРАФИИ

Отходы

ИДЕНТИЧНОСТЬ БРЕНДА

SHOPIFY ДИЗАЙН + РАЗРАБОТКА

НАПРАВЛЕНИЕ ФОТОГРАФИИ

ТВОРЧЕСКИЕ АКТИВЫ

Товары для кожи Отто

ИДЕНТИЧНОСТЬ БРЕНДА

SHOPIFY ДИЗАЙН + РАЗРАБОТКА

НАПРАВЛЕНИЕ ФОТОГРАФИИ

ТВОРЧЕСКИЕ АКТИВЫ

Стержень для ногтей W

ИДЕНТИЧНОСТЬ БРЕНДА

SHOPIFY ДИЗАЙН + РАЗРАБОТКА

НАПРАВЛЕНИЕ ФОТОГРАФИИ

ТВОРЧЕСКИЕ АКТИВЫ

Тетя Флоу

SHOPIFY ДИЗАЙН + РАЗРАБОТКА

WordPress ДИЗАЙН + РАЗРАБОТКА

НАПРАВЛЕНИЕ ФОТОГРАФИИ

ТВОРЧЕСКИЕ АКТИВЫ

Любовь + будь здоров

ДИЗАЙН САЙТА + РАЗРАБОТКА

Структурная основа выбора сайта-мишени в системах транспозиции ДНК под управлением РНК

. 2021 13 августа; 373 (6556): 768-774.

doi: 10.1126/science.abi8976. Epub 2021 15 июля.

Юнг-Ун Парк ¹ , Эми Вей-Лун Цай  ^{# 1} , Эшан Мехротра  ^{# 1} , Майкл Т. Петасси  ^{# 2} , Шан-Чи Се  ^{# 2} , Айлонг Ке ¹ , Джозеф Э. Питерс ³ , Элизабет Х. Келлог ⁴

Принадлежности

• ¹ Кафедра молекулярной биологии и генетики, Корнельский университет, Итака, Нью-Йорк 14853, США.
• ² Кафедра микробиологии, Корнельский университет, Итака, Нью-Йорк 14853, США.
• ³ Кафедра микробиологии, Корнельский университет, Итака, Нью-Йорк 14853, США. joe.peters@cornell.edu ehk68@cornell.edu.
• ⁴ Кафедра молекулярной биологии и генетики, Корнельский университет, Итака, Нью-Йорк 14853, США. joe.peters@cornell.edu ehk68@cornell.edu.

^# Внесли поровну.

• PMID: 34385391
• PMCID: PMC
  59
• DOI: 10.1126/наука.abi8976

Бесплатная статья ЧВК

Юнг-Ун Пак и др. Наука. 2021 .

Бесплатная статья ЧВК

. 2021 13 августа; 373 (6556): 768-774.

doi: 10.1126/science.abi8976. Epub 2021 15 июля.

Авторы

Юнг-Ун Парк ¹ , Эми Вей-Лун Цай  ^{# 1} , Эшан Мехротра  ^{# 1} , Майкл Т. Петасси  ^{# 2} , Шан-Чи Се  ^{# 2} , Айлонг Ке ¹ , Джозеф Э. Питерс ³ , Элизабет Х. Келлог ⁴

Принадлежности

• ¹ Кафедра молекулярной биологии и генетики, Корнельский университет, Итака, Нью-Йорк 14853, США.
• ² Кафедра микробиологии, Корнельский университет, Итака, Нью-Йорк 14853, США.
• ³ Кафедра микробиологии, Корнельский университет, Итака, Нью-Йорк 14853, США. joe.peters@cornell.edu ehk68@cornell.edu.
• ⁴ Кафедра молекулярной биологии и генетики, Корнельский университет, Итака, Нью-Йорк 14853, США. joe.peters@cornell.edu ehk68@cornell.edu.

^# Внесли поровну.

• PMID: 34385391
• PMCID: PMC
  59
• DOI: 10. 1126/наука.abi8976

Абстрактный

Системы транспозиции, связанные с CRISPR, позволяют направлять РНК-направленную интеграцию одного груза ДНК в одной ориентации на фиксированном расстоянии от программируемой последовательности-мишени. Мы использовали криоэлектронную микроскопию (крио-ЭМ), чтобы определить механизм, лежащий в основе этого процесса, путем характеристики регулятора транспозиции, TnsC, из системы CRISPR-транспозазы типа V-K. В этом сценарии полимеризация спиральных филаментов TnsC, связанных с аденозинтрифосфатом, может объяснить, как информация о полярности передается транспозазе. TniQ покрывает филамент TnsC, представляя собой универсальный механизм передачи информации о мишени в Tn7/Tn7-подобных элементах. Разборка, управляемая транспозазой, обеспечивает доставку элемента только в неиспользованные протоспейсеры. Наконец, переходы TnsC определяют фиксированную точку вставки, как показано структурами с имитацией переходного состояния ADP•AlF ₃ Эти механистические открытия обеспечивают основу для разработки систем транспозиции, связанных с CRISPR, для исследовательских и терапевтических приложений.

Copyright © 2021 Авторы, некоторые права защищены; эксклюзивный лицензиат Американской ассоциации содействия развитию науки. Претензий к оригинальным работам правительства США нет.

Заявление о конфликте интересов

Конкурирующие интересы: Лаборатория Петерса имеет корпоративное финансирование для исследований, которые не имеют прямого отношения к работе в этой публикации. Корнельский университет подал патентные заявки в J.E.P. как изобретатель, использующий системы CRISPR-Cas, связанные с транспозонами, которые не имеют прямого отношения к этой работе.

Цифры

Рисунок 1. АТФ имеет решающее значение для обоих…

Рисунок 1. АТФ имеет решающее значение как для РНК-управляемой транспозиции ShCAST, так и для сборки филаментов…

Рисунок 1. АТФ имеет решающее значение как для управляемой РНК транспозиции ShCAST, так и для сборки филаментов регулятора AAA+ TnsC.

(А). Транспозон ShCAST определяется правым (R) и левым (L) концами элемента, кодирующего: Cas12k РНК-связывающий эффектор, TniQ, TnsC и TnsB, трансактивирующую crРНК (tracrRNA) и массив CRISPR . Двойная косая черта обозначает область, в которой в транспозоне находятся гены-карго. ( B) Гидролиз АТФ необходим для направленной РНК-управляемой транспозиции. Показаны подсчеты колоний в результате трансформации каждой реакции транспозиции депротеина в качестве показателя общей активности транспозиции (при трансформации использовалась одна треть общего объема реакции). Данные показывают среднее +/- стандартное отклонение (n=3). Реакционные смеси дополнительно анализировали с помощью ПЦР с использованием концевого праймера транспозона (L или R) вместе с праймерами, фланкирующими целевой сайт, как показано на схеме слева. Высокая скорость вставки в мишень приводит к одной интенсивной полосе, в то время как вставки, распределенные вокруг плазмиды-мишени, приводят к ряду продуктов ПЦР. Показано одно репрезентативное изображение n = 3 повторений. ( C) Крио-ЭМ-реконструкция с высоким разрешением (3,2 Å) ATPγS-TnsC (светло- и темно-зеленый) образует непрерывную спиральную нить, окружающую ДНК (синий). Расположение слоев (6 субъединиц TnsC) внутри нити называется здесь конфигурацией «голова к хвосту». ( D) Атомная модель спирального филамента TnsC состоит из 6 субъединиц TnsC, расположенных по спиральной спирали. ( E) АТФ-связывающий карман соответствует каноническим характеристикам белков AAA+ с консервативными мотивами Уокера А (розовый) и Уокера В (фиолетовый), координирующими связывание АТФγS. Соседняя субъединица (светло-голубая) образует межсубъединичные контакты, которые частично способствуют формированию филамента за счет взаимодействия с концевым фосфатом.

Рисунок 2. Структурный анализ взаимодействий TnsC-ДНК…

Рисунок 2. Структурный анализ взаимодействий TnsC-ДНК показывает, как TnsC искажает ДНК; в сочетании с крио-ЭМ…

Рисунок 2. Структурный анализ взаимодействий TnsC-ДНК показывает, как TnsC искажает ДНК; в сочетании с экспериментами с временным ходом на основе крио-ЭМ эти данные предполагают, что TnsC полимеризуется в направлении от 5 ‘к 3’.

(A) Каждая субъединица TnsC образует два основных контакта с сахаро-фосфатным остовом ДНК (синий, палочки), избирательно формируя лестницу взаимодействий с одной цепью ДНК. ( B) Взаимодействия TnsC-ДНК приводят к искажениям ДНК. Один полный виток ДНК B-формы охватывает 34 Å (серый), однако расстояние между слоями (41 Å) растягивает ДНК, искажая один полный виток дуплексной ДНК, чтобы соответствовать промежутку спирали TnsC. ( C) Доля наблюдаемых столкновений филаментов, иначе называемых филаментами «голова к голове», зависит как от нуклеотида (АТФ против АТФγS), так и от увеличения со временем (больше присутствует через 12 часов по сравнению с 10 минутами). Соответствующие средние значения класса 2D для каждого образца показаны с масштабной линейкой 100 Å.

Рисунок 3. Крио-ЭМ структура TniQ-TnsC показывает…

Рисунок 3. Крио-ЭМ-структура TniQ-TnsC показывает, как белок-селектор сайта-мишени, TniQ, связывается в…

Рисунок 3. Крио-ЭМ-структура TniQ-TnsC показывает, как белок-селектор сайта-мишени, TniQ, связывающийся с сайтом-мишенью, может взаимодействовать с полимеризующимся TnsC.

(A) TniQ из ShCAST усечен по отношению к I-F3 TniQ. Цифры обозначают положение остатков. Указаны функциональные домены, соответствующие мотиву спираль-поворот-спираль (HTH, оранжевый) и мотиву ленты цинковых пальцев (ZnF, розовый). Светло-голубой домен (только в I-F3) соответствует С-концевому мотиву крылатая спираль-поворот-спираль и отсутствует в ShCAST TniQ. ( B) Две копии TniQ (оранжевый/розовый) взаимодействуют с головным интерфейсом АТФ-связанного филамента TnsC. Каждый мономер TniQ взаимодействует с двумя субъединицами (светло-темно-зелеными) TnsC. Показанная карта Cryo-EM отфильтрована в соответствии с оценками локального разрешения (Bsoft). N-конец TniQ помечен как «N». ( C) Гомологические модели мотивов спираль-поворот-спираль (HTH) и цинковый палец (ZnF) хорошо согласуются с наблюдаемой картой плотности крио-ЭМ. Показана крио-ЭМ плотность для ShCAST TniQ, TnsC (зеленый) и ДНК (синий) отображаются на ленте.

Рисунок 4. Крио-ЭМ структура ADP•AlF _3…

Рис. 4. Крио-ЭМ структура ADP•AlF ₃ связанный TnsC имеет закрытую гексамерную структуру, которая…

Рисунок 4. Крио-ЭМ-структура связанного ADP•AlF ₃ TnsC имеет закрытую гексамерную структуру, которая не способна поддерживать распространение филамента.

(A) Консенсусная карта плотности ADP•AlF ₃ 3,9 Å показывает конфигурацию гексамеров, связанных с дуплексной ДНК, «голова к голове». На рисунке (слева) показана относительная ориентация каждого гексамера. Эта структура не может поддерживать образование более чем одного спирального витка, обозначенного треугольным символом (представляющим конформационные изменения внутри гексамера по сравнению с моделью нити на рисунке 1C) и полосами, указывающими на то, что полимеризация ингибируется. ( B) Субъединицы TnsC репозиционированы так, что терминальный фосфат находится слишком далеко (5 – 7 Å), чтобы координироваться межсубъединичными контактами: Q185 и R189. ( C) Разница в положении субъединицы приводит к меньшему подъему (обозначен пунктирными линиями) гексамера ADP•AlF ₃ по сравнению с АТФ-связанным филаментом TnsC (6,3 против 6,8 Å на субъединицу), что приводит к ‘ закрытая конфигурация, которая не может вместить другую субъединицу для распространения спиральной нити.

Рисунок 5. Механистическая модель, описывающая роль TnsC…

Рисунок 5. Механистическая модель, описывающая роль TnsC в выборе целевого сайта.

TnsC способствует изучению альтернативных…

Рисунок 5. Механистическая модель, описывающая роль TnsC в выборе целевого сайта.

TnsC способствует исследованию альтернативных сайтов-мишеней путем полимеризации вдоль ДНК. ( A ) Элементы ShCAST могут существовать в подвижных плазмидах или в сайтах прикрепления (обозначенных фиолетовым сегментом) внутри бактериальных хромосом. TnsB вокруг предыдущих сайтов встраивания (красный кружок) запускает деполимеризацию TnsC (обозначено черными полосами), тем самым делая сайты «невосприимчивыми» к встраиванию. ( B — E ) Результаты обобщены с использованием концептуального мультфильма, описывающего функцию TnsC. Фильм S2 обобщает ту же информацию, используя сообщенные структуры. ( B ) TnsC полимеризуется однонаправленно вдоль ДНК (зеленые полукруги) на любой из цепей в присутствии АТФ в направлении от 5’ к 3’. ( C ) Как только TnsC встречается с Cas12k-TniQ, его дальнейшая полимеризация предотвращается, и он образует комплекс с TniQ. ( D ) TnsB (связанный с концевыми концами транспозона) способен стимулировать деполимеризацию TnsC и одновременно рекрутироваться в сайт-мишень. ( E ) TnsC разбирается на конечную олигомерную сборку (обозначенную зеленым треугольником, которая представляет собой конформационное изменение, которое не может поддерживать непрерывную спиральную нить), что позволяет интегрировать фиксированное расстояние от протоспейсера.

См. это изображение и информацию об авторских правах в PMC

Похожие статьи

• Селективное рекрутирование TnsC повышает точность РНК-управляемой транспозиции.

  Hoffmann FT, Kim M, Beh LY, Wang J, Vo PLH, Gelsinger DR, George JT, Acree C, Mohabir JT, Fernández IS, Sternberg SH. Хоффманн Ф.Т. и др. Природа. 2022 сен; 609 (7926): 384-393. дои: 10.1038/s41586-022-05059-4. Epub 2022 24 августа. Природа. 2022. PMID: 36002573

• Механизм рекрутирования и интеграции транспозонов, связанных с CRISPR, выявлен с помощью крио-ЭМ.

  Пак Дж.У., Цай А.В., Чен Т.Х., Питерс Дж.Е., Келлогг Э.Х. Пак Ю и др. Proc Natl Acad Sci U S A. 2022 Aug 9;119(32):e22025. doi: 10.1073/pnas.22025. Epub 2022 1 августа. Proc Natl Acad Sci U S A. 2022. PMID: 35914146 Бесплатная статья ЧВК.

• Выбор и ремоделирование целевого сайта с помощью систем CRISPR-транспозонов типа V.

  Кверкес И., Шмитц М., Оберли С., Чанез С., Джинек М. Querques I и др. Природа. 2021 ноябрь;599(7885):497-502. doi: 10.1038/s41586-021-04030-z. Epub 2021 10 ноября. Природа. 2021. PMID: 34759315 Бесплатная статья ЧВК.

• Анализ мутантов с усилением функции АТФ-зависимого регулятора транспозиции Tn7.

  Stellwagen AE, Craig NL. Stellwagen AE и др. Дж Мол Биол. 2001 19 января; 305 (3): 633-42. doi: 10.1006/jmbi.2000.4317. Дж Мол Биол. 2001. PMID: 11152618

• Двойной режим CRISPR-ассоциированного самонаведения транспозонов.

  Сайто М., Ладха А., Стрекер Дж., Форе Г., Нойманн Э., Алтае-Тран Х., Макрэ Р.К., Чжан Ф. Сайто М. и др. Клетка. 2021 апр 29;184(9):2441-2453.e18. doi: 10.1016/j.cell.2021.03.006. Epub 2021 25 марта. Клетка. 2021. PMID: 33770501 Бесплатная статья ЧВК.

Посмотреть все похожие статьи

Цитируется

• CRISPRtracrRNA: надежный подход к обнаружению CRISPR tracrRNA.

  Митрофанов А., Циманн М., Алхнбаши О.С., Хесс В.Р., Баккофен Р. Митрофанов А и др. Биоинформатика. 2022, 16 сентября; 38 (Приложение_2): ii42-ii48. дои: 10.1093/биоинформатика/btac466. Биоинформатика. 2022. PMID: 36124799 Бесплатная статья ЧВК.

• Селективное рекрутирование TnsC повышает точность РНК-управляемой транспозиции.

  Hoffmann FT, Kim M, Beh LY, Wang J, Vo PLH, Gelsinger DR, George JT, Acree C, Mohabir JT, Fernández IS, Sternberg SH. Хоффманн Ф.Т. и др. Природа. 2022 сен; 609 (7926): 384-393. doi: 10.1038/s41586-022-05059-4. Epub 2022 24 августа. Природа. 2022. PMID: 36002573

• Механизм рекрутирования и интеграции транспозонов, связанных с CRISPR, выявлен с помощью крио-ЭМ.

  Пак Дж.У., Цай А.В., Чен Т.Х., Питерс Дж.Е., Келлогг Э.Х. Пак Ю и др. Proc Natl Acad Sci U S A. 2022 Aug 9;119(32):e22025. doi: 10.1073/pnas.22025. Epub 2022 1 августа. Proc Natl Acad Sci U S A. 2022. PMID: 35914146 Бесплатная статья ЧВК.

• Перепрофилирование системы интеграз, управляемой РНК CRISPR, для одноэтапной эффективной геномной интеграции сверхдлинных последовательностей ДНК.

  Cheng ZH, Wu J, Liu JQ, Min D, Liu DF, Li WW, Yu HQ. Ченг З.Х. и др. Нуклеиновые Кислоты Res. 2022 22 июля; 50 (13): 7739-7750. doi: 10.1093/nar/gkac554. Нуклеиновые Кислоты Res. 2022. PMID: 35776123 Бесплатная статья ЧВК.

• Структурная биология иммунитета CRISPR-Cas и ферментов редактирования генома.

  Ван ДЖ., Пауш П., Дудна Д.А. Ван Цзи и др. Nat Rev Microbiol. 2022 г., 13 мая. doi: 10.1038/s41579-022-00739-4. Онлайн перед печатью. Nat Rev Microbiol. 2022. PMID: 35562427 Обзор.

Просмотреть все статьи «Цитируется по»

Типы публикаций

термины MeSH

вещества

Дополнительные понятия

Грантовая поддержка

• R01 GM144566/GM/NIGMS NIH HHS/США
• R01 GM129118/GM/NIGMS NIH HHS/США
• R00 GM124463/GM/NIGMS NIH HHS/США
• R21 AI148941/AI/NIAID NIH HHS/США
• R35 GM118174/GM/NIGMS NIH HHS/США

Структурная основа связывания STING и фосфорилирования с помощью TBK1

Abstract

Инвазия в цитоплазму млекопитающих микробной ДНК из инфекционных патогенов или собственной ДНК из ядра или митохондрий представляет собой сигнал опасности, который предупреждает иммунную систему хозяина ¹ . Циклическая GMP-AMP-синтаза (cGAS) представляет собой сенсор цитоплазматической ДНК, который активирует путь интерферона I типа ² . При связывании с ДНК cGAS активируется, катализируя синтез циклического GMP-AMP (cGAMP) из GTP и АТФ ³ . cGAMP действует как вторичный мессенджер, который связывается и активирует стимулятор генов интерферона (STING) ^{3,4,5,6,7,8,9} . Затем STING рекрутирует и активирует kinase 1 (TBK1), связывающую резервуары, которая фосфорилирует STING и транскрипционный фактор IRF3, чтобы индуцировать интерфероны типа I и др. цитокины ^10,11 . Однако то, как STING, связанный с cGAMP, активирует TBK1 и IRF3, неясно. Здесь мы представляем структуру криоэлектронной микроскопии человеческого TBK1 в комплексе с цГАМФ-связанным полноразмерным куриным STING. Структура показывает, что C-концевой хвост STING принимает конформацию, подобную β-цепи, и вставляется в бороздку между киназным доменом одной субъединицы TBK1 и каркасом и доменом димеризации второй субъединицы в димере TBK1. В этом режиме связывания сайт фосфорилирования Ser366 в хвосте STING не может достичь активного сайта киназного домена связанного TBK1, что предполагает, что фосфорилирование STING с помощью TBK1 требует олигомеризации обоих белков. Мутационный анализ подтверждает способ взаимодействия между TBK1 и STING и поддерживает модель, в которой олигомеризация STING и TBK1 высокого порядка, индуцированная cGAMP, приводит к фосфорилированию STING с помощью TBK1.

Это предварительный просмотр содержимого подписки, доступ через ваше учреждение

Соответствующие статьи

Статьи открытого доступа со ссылками на эту статью.

• Новая роль передачи сигналов STING при повреждении ЦНС: воспаление, аутофагия, некроптоз, ферроптоз и пироптоз

  • Синьли Ху
  • , Хаоцзе Чжан
  •  … Кайлян Чжоу

  Журнал нейровоспаления Открытый доступ 04 октября 2022 г.

• NAT10 регулирует пироптоз нейтрофилов при сепсисе посредством ацетилирования РНК ULK1 и активации пути STING.

  • Хао Чжан
  • , Чжаоюань Чен
  •  … Ванькун Чен

  Биология коммуникаций Открытый доступ 06 сентября 2022 г.

• Транскрипционно-независимая регуляция активации STING и врожденных иммунных ответов с помощью IRF8 в моноцитах

  • Вэй-Вэй Луо
  • , Чжэнь Тонг
  •  … Ян-И Ван

  Связь с природой Открытый доступ 16 августа 2022 г.

Варианты доступа

Подписаться на журнал

Получить полный доступ к журналу на 1 год

199,00 €

всего 3,90 € за выпуск

Подписаться

Расчет налогов будет завершен во время оформления заказа.

Купить статью

Получите ограниченный по времени или полный доступ к статье на ReadCube.

$32,00

Купить

Все цены указаны без учета стоимости.

Рис. 1: Структура комплекса куриного STING и человеческого TBK1. Рис. 2: Интерфейс связывания между человеческим TBK1 и С-концевым хвостом STING курицы. Рис. 3: Интерфейс между TBK1 и С-концевым хвостом STING необходим для связывания TBK1 и колокализации со STING в клетках. Рис. 4: Активация TBK1 и фосфорилирование STING зависят от олигомеризации STING.

Доступность данных

Крио-ЭМ-карта хвостового комплекса TBK1–STING депонирована в Банк данных электронной микроскопии (EMDB) под номером доступа EMD-0506. Атомные координаты комплекса депонированы в PDB под инвентарным номером 6NT9.

Ссылки

1. Li, T. & Chen, Z. J. Путь cGAS-cGAMP-STING связывает повреждение ДНК с воспалением, старением и раком. Дж. Эксп. Мед . 215 , 1287–1299 (2018).

   КАС Статья Google ученый

2. Sun, L., Wu, J., Du, F., Chen, X. & Chen, Z. J. Циклическая GMP-AMP-синтаза представляет собой цитозольный ДНК-сенсор, который активирует путь интерферона I типа. Наука 339 , 786–791 (2013).

   ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья Google ученый

3. «>

   Ву, Дж. и соавт. Циклический GMP-AMP является эндогенным вторичным мессенджером в передаче сигналов врожденного иммунитета цитозольной ДНК. Наука 339 , 826–830 (2013).

   ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья Google ученый

4. Ishikawa, H. & Barber, G. N. STING — это адаптер эндоплазматического ретикулума, который способствует передаче сигналов врожденного иммунитета. Природа 455 , 674–678 (2008).

   ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья Google ученый

5. Zhong, B. et al. Адаптерный белок MITA связывает рецепторы, чувствительные к вирусам, с активацией фактора транскрипции IRF3. Иммунитет 29 , 538–550 (2008 г.).

   КАС Статья Google ученый

6. Сайто, Т. и др. Atg9a контролирует управляемую двухцепочечной ДНК динамическую транслокацию STING и врожденный иммунный ответ. Проц. Натл акад. науч. США 106 , 20842–20846 (2009 г.).

   ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья Google ученый

7. Джин, Л. и др. MPYS, новый мембранный тетраспаннер, связан с главным комплексом гистосовместимости класса II и опосредует передачу апоптотических сигналов. Мол. Клетка. Биол . 28 , 5014–5026 (2008).

   КАС Статья Google ученый

8. Burdette, D.L. et al. STING является датчиком прямого врожденного иммунитета циклического ди-ГМФ. Природа 478 , 515–518 (2011).

   ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья Google ученый

9. Zhang, X. et al. Циклический GMP-AMP, содержащий смешанные фосфодиэфирные связи, является эндогенным высокоаффинным лигандом для STING. Мол. Cell 51 , 226–235 (2013).

   КАС Статья Google ученый

10. Кай, X., Чиу, Ю. Х. и Чен, З. Дж. Путь cGAS-cGAMP-STING восприятия цитозольной ДНК и передачи сигналов. Мол. Cell 54 , 289–296 (2014).

    КАС Статья Google ученый

11. Лю, С. и др. Фосфорилирование адапторных белков врожденного иммунитета MAVS, STING и TRIF индуцирует активацию IRF3. Наука 347 , aaa2630 (2015).

    Артикул Google ученый

12. Шан Г., Чжан К., Чен З. Дж., Бай Х.-к. & Zhang, X. Крио-ЭМ структуры STING раскрывают его механизм активации с помощью циклического GMP-AMP. Природа https://doi.org/10.1038/s41586-019-0998-5 (2019).

13. Bai, XC, Rajendra, E., Yang, G., Shi, Y. & Scheres, SH. Выборка конформационного пространства каталитической субъединицы γ-секретазы человека. eLife 4 , e11182 (2015 г.).

    Артикул Google ученый

14. Лараби, А. и др. Кристаллическая структура и механизм активации TANK-связывающей киназы 1. Cell Reports 3 , 734–746 (2013).

    КАС Статья Google ученый

15. Ту, Д. и др. Структура и убиквитин-зависимая активация TANK-связывающей киназы 1. Cell Reports 3 , 747–758 (2013).

    КАС Статья Google ученый

16. Шу, К. и др. Структурное понимание функций TBK1 во врожденном противомикробном иммунитете. Структура 21 , 1137–1148 (2013).

    КАС Статья Google ученый

17. Чжао, Б. и др. Структурная основа согласованного рекрутирования и активации IRF-3 адапторными белками врожденного иммунитета. Проц. Натл акад. науч. США 113 , E3403–E3412 (2016 г.).

    КАС Статья Google ученый

18. Лу, Д. и др. Структурное понимание эффекторного белка Tse3 Tse3 и комплекса Tse3-Tsi3 из Pseudomonas aeruginosa обнаруживают кальций-зависимый мембраносвязывающий механизм. Мол. Микробиол . 92 , 1092–1112 (2014).

    КАС Статья Google ученый

19. Zheng, S.Q. et al. MotionCor2: анизотропная коррекция движения, вызванного лучом, для улучшения криоэлектронной микроскопии. Нац. Методы 14 , 331–332 (2017).

    КАС Статья Google ученый

20. Чжан, К. Gctf: определение и коррекция CTF в режиме реального времени. Дж. Структура. Биол . 193 , 1–12 (2016).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья Google ученый

21. «>

    Scheres, S.H. RELION: реализация байесовского подхода к определению структуры крио-ЭМ. Дж. Структура. Биол . 180 , 519–530 (2012).

    КАС Статья Google ученый

22. Эмсли П., Локамп Б., Скотт В. Г. и Коутан К. Особенности и развитие Coot. Acta Кристаллогр. D 66 , 486–501 (2010).

    КАС Статья Google ученый

23. Адамс, П. Д. и др. PHENIX: комплексная система на основе Python для решения макромолекулярной структуры. Acta Кристаллогр. Д 66 , 213–221 (2010).

    КАС Статья Google ученый

24. Chen, V.B. et al. MolProbity: проверка структуры всех атомов для макромолекулярной кристаллографии. Acta Кристаллогр. Д 66 , 12–21 (2010).

    КАС Статья Google ученый

25. «>

    Pettersen, E. F. et al. UCSF Chimera — система визуализации для поисковых исследований и анализа. Дж. Вычисл. Химия . 25 , 1605–1612 (2004).

    КАС Статья Google ученый

26. Гуэ, П., Курсель, Э., Стюарт, Д. И. и Метоз, Ф. ESPript: анализ множественных выравниваний последовательностей в PostScript. Биоинформатика 15 , 305–308 (1999).

    КАС Статья Google ученый

Загрузить ссылки

Благодарности

Мы благодарим H. Yu и R. Hibbs за обмен инструментами и реагентами, а также X. Tan за вклад в анализ некоторых мутантов STING. Данные крио-ЭМ были собраны в Центре криоэлектронной микроскопии Юго-Западного медицинского центра Техасского университета (UTSW), который финансируется Техасским институтом профилактики и исследования рака (CPRIT) в рамках премии RP170644. Мы благодарим Д. Никастро за доступ к объекту и сбор данных. Эта работа частично поддерживается Медицинским институтом Говарда Хьюза (Z.J.C.), грантами Национального института здравоохранения (GM088197 и R35GM130289 до XZ), гранты фонда Welch (I-1389 до ZJC; I-1702 до XZ; I-1944 до X.-c.B) и гранты CPRIT (RP150498 до ZJC; RP160082 до X.-cB.) . X.-c.B. и Х.З. являются учеными Вирджинии Мерчисон Linthicum в области медицинских исследований в UTSW. Z.J.C. является исследователем Медицинского института Говарда Хьюза.

Информация для рецензентов

Nature благодарит Андреа Аблассер, Филипа Кранзуша и Осаму Нуреки за их вклад в рецензирование этой работы.

Информация об авторе

Примечания автора

1. Эти авторы внесли равный вклад: Conggang Zhang, Guijun Shang.

Авторы и организации

1. Кафедра молекулярной биологии Юго-западного медицинского центра Техасского университета, Даллас, Техас, США Техасский юго-западный медицинский центр, Даллас, Техас, США

   Guijun Shang & Xuewu Zhang

2. Кафедра биофизики Юго-западного медицинского центра Техасского университета, Даллас, Техас, США Center, Dallas, TX, USA

   Xiao-chen Bai

3. Центр исследований воспалений, Юго-западный медицинский центр Техасского университета, Dallas, TX, USA

   Zhijian J. Chen

4. Медицинский институт Говарда Хьюза, Юго-западный медицинский центр Техасского университета, Даллас, Техас, США

   Zhijian J. Chen

Авторы

1. Conggang Zhang

   Вы также можете искать этого автора 3 публикации

   в PubMed Google Scholar

2. Guijun Shang

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Академия

3. Xiang Gui

   Посмотреть публикации автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

4. Xuewu Zhang

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

5. Xiao-chen Bai

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

6. Zhijian J. Chen

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

Вклады

Все авторы участвовали в разработке исследования, анализе данных и подготовке рукописи; Г. С. и К.З. подготовили образцы белка для крио-ЭМ; X.-c.B., Г.С. и X.Z. сбор данных, обработка изображений, определение структуры и анализ; Ч.З. и Х.Г. проводили функциональные анализы под наблюдением Z.J.C.

Авторы переписки

Переписка с Сюэу Чжан, Сяо-чень Бай или Чжицзянь Дж. Чен.

Заявление об этике

Конкурирующие интересы

Авторы не заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.

Дополнительная информация

Примечание издателя: Springer Nature остается нейтральной в отношении юрисдикционных претензий в опубликованных картах и ​​институциональной принадлежности.

Расширенные данные и таблицы

Расширенные данные Рис. 1 Очистка STING и TBK1 и характеристика их взаимодействия.

a , Связывание между очищенным человеческим STING и TBK1. Tsi3-меченый TBK1 был захвачен гранулами, конъюгированными с Tse3. Вытягивание STING с помощью TBK1 оценивали с помощью вестерн-блоттинга. ИБ, иммуноблоттинг; СТИНГ-ФЛ, полноразмерный СТИНГ; ЖАЛО-Δхвост, ЖАЛО(1–343). b , STING человека и курицы способны индуцировать фосфорилирование человеческого TBK1 в клетках. Клетки HeLa-C9 с неопределяемым эндогенным STING использовали для создания клеточных линий, стабильно экспрессирующих STING-Flag человека или STING-Flag курицы. Клетки стимулировали цГАМФ (1 мкМ) и анализировали на фосфорилирование TBK1 с помощью иммуноблоттинга. c , Гель-фильтрационная хроматография гибридного комплекса STING курицы и TBK1 человека. Данные являются репрезентативными для двух независимых экспериментов.

Расширенные данные Рисунок 2 Блок-схема обработки крио-ЭМ изображений для комплекса между куриным STING и человеческим TBK1.

a , репрезентативная микрофотография. b , Репрезентативные 2D-классы неповрежденного комплекса. c , Репрезентативные 2D-классы обработки изображений, ориентированной на TBK1. №  > 3. d , f , Окончательные реконструкции неповрежденного комплекса STING–TBK1 ( d ) и уточнения, ориентированного на TBK1 ( f ), с цветами, основанными на локальном разрешении. e , g , Кривые FSC золотого стандарта окончательных 3D-реконструкций неповрежденного комплекса и уточнения, ориентированного на TBK1. h , Процедура обработки изображения.

Расширенные данные Рис. 3 Карты плотности образцов.

Карты плотности образцов показаны для С-концевого хвоста STING курицы и различных частей человеческого TBK1.

Расширенные данные Рис. 4 Структурное сравнение апо TBK1 (код PDB 4IM0) и TBK1, связанного со STING.

a , Общие конструкции TBK1. b , Увеличенное изображение областей TBK1, связанных с С-концевым хвостом STING.

Расширенные данные Рис. 5 Сохранение последовательности TBK1 человека и курицы.

Остатки, идентичные в TBK1 обоих видов, окрашены в серый цвет. Неконсервативные остатки окрашены в красный цвет; неидентичные, но похожие остатки окрашены в розовый цвет.

Расширенные данные Рис. 6 Связывание и фосфорилирование STING с помощью TBK1 зависит от интерфейса между TBK1 и С-концевым хвостом STING, а также от олигомеризации STING.

a , Мутации TBK1-связывающих остатков в хвосте STING уменьшают cGAMP-индуцированное фосфорилирование как TBK1, так и STING. Постнуклеарный супернатант S1 от клеток HEK293T, которые экспрессировали либо STING дикого типа, либо мутанты, инкубировали с АТФ в присутствии или в отсутствие cGAMP и подвергали анализу иммуноблоттинга на pTBK1, pSTING и STING. b, c, Мутации TBK1-связывающих остатков в хвосте STING снижают cGAMP-индуцированное фосфорилирование STING (b), но не олигомеризацию STING (c). Те же образцы, что и в и , были разрешены с помощью нативных гелей и проанализированы с помощью иммуноблоттинга. d – f , Мутации на границе олигомеризации STING снижают олигомеризацию STING, индуцированную cGAMP, а также фосфорилирование TBK1 и STING. Мутанты основаны на сопроводительном документе о структурах полноразмерного STING 9.0279 12 . Анализы в d , e и f проводились таким же образом, как и в a , b и c , соответственно. Показанные здесь данные являются репрезентативными как минимум для трех независимых биологических повторов.

Расширенные данные Рис. 7 Мультипликационная модель STING-опосредованной активации TBK1 и нижестоящего сигнального пути.

Индуцированная cGAMP олигомеризация STING приводит к кластеризации TBK1 и транс-аутофосфорилированию. Активированный TBK1 фосфорилирует С-концевые хвосты STING, которые не связаны с бороздкой SDD-киназного домена в TBK1. Фосфорилированные хвосты STING рекрутируют IRF3, который фосфорилируется TBK1. Фосфорилированный IRF3 образует димер и перемещается в ядро, чтобы инициировать транскрипцию генов IFN.

Расширенные данные Рис. 8 Сбор данных и статистика модели.

a , Сбор данных и статистика уточнения модели. b , Кривые FSC между картами и моделью.

Дополнительная информация

Дополнительная информация

Этот файл содержит дополнительные результаты: Функциональная консервация между человеком и курицей STING.

Сводка отчетов

Дополнительные рисунки

Дополнительный рисунок 1: Исходные необрезанные изображения гелей или пятен.

Видео 1

Увеличенный вид интерфейса между хвостовой частью С-терминала STING и TBK1.

Права и разрешения

Перепечатка и разрешения

Об этой статье

Дополнительная литература

• Новая роль передачи сигналов STING при повреждении ЦНС: воспаление, аутофагия, некроптоз, ферроптоз и пироптоз

  • Синьли Ху
  • Хаоцзе Чжан
  • Кайлян Чжоу

  Журнал нейровоспаления (2022)

• Геовременно-пространственный и причинно-следственный эпидемиологический обзор и обзор генотоксичности каннабиса, каннабидиола и каннабиноидов в США, выраженной в заболеваемости раком, 2003–2017 гг .

  : часть 3 — пространственно-временной, многовариантный и причинно-следственный вывод и исследовательский анализ рака предстательной железы и яичников.
  • Альберт Стюарт Рис
  • Гэри Кеннет Халс

  Архив общественного здравоохранения (2022)

• Роль TBK1 в патогенезе рака и противоопухолевом иммунитете

  • Остин П. Рунде
  • Райан Мак
  • Дживан Чжан

  Журнал экспериментальных и клинических исследований рака (2022)

• Молекулярное клонирование, характеристика и функциональный анализ неохарактеризованного C11orf96 ген

  • Хунзао Ян
  • Цзе Чжу
  • Гуанцин Лю

  Ветеринарные исследования BMC (2022)

• Крио-ЭМ структура активного бактериального комплекса филаментов TIR-STING

  • Бенджамин Р.