Цель проекта: Увеличение по итогам 2024 года до 55% доли граждан, систематически занимающихся физической культурой и спортом, путем создания системы мотивации населения, активизации спортивно-массовой работы на всех уровнях, подготовки спортивного резерва и развития спортивной инфраструктуры.

2

крытых катка построено и введено в эксплуатацию в 2020 году

2

школы олимпийского резерва получили новое спортивное оборудование

253

физкультурных мероприятия проведены для всех категорий и групп населения

38

внутридворовых спортивных площадок отремонтированы и оснащены оборудованием

Работа с почтой Google Workspace | REG.

Чтобы использовать Google Workspace для домена:

1. 1. Авторизуйтесь на сайте REG.RU и перейдите к списку ваших услуг.
2. 2.

   Нажмите на кнопку Google Workspace для домена:

3. 3.

   Затем кликните Войти в панель:

4. 4.

   На открывшейся странице в блоке «Пользователи» нажмите Добавьте пользователя:

5. org/HowToStep»> 5.

   Заполните «Имя», «Фамилию» и «Основной адрес электронной почты». Нажмите Новый пользователь:

Готово, вы создали пользователя для работы с почтой.

Как изменить количество пользователей Google Workspace

Вы можете изменить количество пользователей на Google Workspace на тарифах «Гибкий» и «Годовой»:

• на тарифном плане «Гибкий» вы можете как увеличить, так и уменьшить количество пользователей;
  
• на тарифе «Годовой» — только увеличить.

Чтобы изменить количество пользователей:

1. 1.

   Авторизуйтесь на сайте REG.RU.

2. 2. Перейдите в раздел Все услуги.
3. org/HowToStep»> 3.

   Нажмите на кнопку Google Workspace для домена.

4. 4.

   В строке «Пользователей» нажмите Изменить.

5. 5.

   Введите нужное количество пользователей и нажмите кнопку Изменить.

Готово, количество пользователей изменено.

3 раза уже
помогла

Самые популярные российские сайты — Яндекс, Рамблер, Mail.ru, Google

ЕС начал официальное антимонопольное расследование в отношении сервисов медийной рекламы Google

В Европейский Комиссия является обеспокоенный Google имеет искаженный соревнование от ограничение в способность из в третьих стороны к доступ Пользователь данные для Реклама цели на веб-сайты а также Программы, . ..

Мэр Ким Джейни и жители Южного Бостона празднуют торжественное открытие нового Западного 2-го парка и общественного сада в Южном Бостоне

Давно пустующий земельный участок в Бостоне, преобразованный в красивое место для встреч сообщества

БОСТОН — вторник, 22 июня 2021 г. — мэр Ким Джейни сегодня присоединился к начальнику отдела жилищного строительства и директору по развитию районов Шейле Диллон, начальнику отдела окружающей среды, энергетики и открытых пространств преподобному Мариаме Уайт-Хаммонд, уполномоченному по паркам и зонам отдыха Бостона Райану Вудсу, Бостон Агентство по планированию и развитию, Друзья Западного Парка 2-й улицы, Корпорация развития района Южного Бостона, местные жители и городские садовники, чтобы отпраздновать торжественное открытие Парка Вест-2-стрит и Общественного сада, расположенного по адресу 175 West 2nd Street в Южном Бостоне.

Ранее пустырь, новый парк и общественный сад площадью 16000 квадратных футов включает в себя как активные, так и пассивные зоны, а также конструктивные особенности, такие как патио, деревья, скамейки, цветочные контейнеры и 21 общественный садовый участок с общими удобствами, такими как компост. урны и сарай для инструментов. Три участка — это грядки, предназначенные для садоводов с ограниченными возможностями. В результате этого проекта к городскому навесу Бостона было добавлено 31 новое дерево.

«Создание общественных зеленых насаждений обеспечивает отличную физическую активность, увеличивает доступ к недорогим здоровым свежим продуктам и сближает жителей наших районов», — сказал мэр Джейни.«Я хочу поблагодарить наших партнеров здесь сегодня за помощь в создании этого прекрасного нового общественного пространства в самом сердце Южного Бостона».

Празднование ознаменовало завершение строительства нового парка и общественного сада, финансируемого за счет взноса сообщества от Breakthrough Properties в рамках утверждения проекта Бостонского агентства по планированию и развитию (BPDA) для строительства 105 West 1st Street, а также совместного контракта между Департамент парков и отдыха и Департамент городского развития на этапе проектирования проекта.

Процесс взаимодействия с общественностью начался в 2015 году, когда Департамент общественных работ передал собственность Департаменту местного развития (DND) для обсуждения вариантов развития участка. Жители Южного Бостона решительно отдали предпочтение тому, чтобы это место было общественной зеленой зоной. Сообщество Южного Бостона, Департамент развития микрорайона и Департамент парков объединились для проведения семинаров по общественному дизайну, в результате чего был составлен план проекта и объем работ для участка.При поддержке района Комиссия парков проголосовала 7 июня за добавление этого объекта в свой инвентарь для долгосрочного владения с условием, что Друзья Вест-2-стрит-Парк и Корпорация развития района Южного Бостона будут нести ответственность за обслуживание участка.

«Это был долгий путь, который потребовал усилий многих людей, выборных должностных лиц, сотрудников города Бостона и жителей Южного Бостона», — сказал активист Южного Бостона Гэри Мурад. «Мы так рады, что добрались до финиша и добавили кусочек к тому, что мы считаем нашим собственным маленьким изумрудным ожерельем, соединяющим этот новый парк с парком Флаэрти и парком A Street.Надеюсь, мы получим дополнительное открытое пространство в качестве блага сообщества, связанного с будущими проектами развития в районе, который добавит к нашему Южному Бостонскому Ожерелью ».

«Все мы в Корпорации развития района Южного Бостона очень рады видеть энтузиазм сообщества по озеленению этих новых участков в этом прекрасном парке», — сказала Донна Браун, исполнительный директор. «Мы с нетерпением ждем возможности работать с новыми и опытными садоводами, чтобы выращивать продукты и наслаждаться этим прекрасным парком. Наша команда благодарна City of Boston и Breakthrough Properties за создание этой невероятной зеленой зоны для наших соседей в Южном Бостоне.”

Сегодняшнее перерезание ленточки в парке и общественном саду на Уэст-2-стрит согласуется с программой DND Grassroots Open Space Program, которая помогает сообществам создавать общественные сады, городские фермы, продовольственные леса и другие открытые пространства на государственных и частных землях. Проект также является частью Плана открытых пространств и отдыха Департамента парков, в котором основное внимание уделяется доступу, равенству и совершенству, чтобы в каждом районе были красивые места, которые служат как людям, так и окружающей среде. Кроме того, Городская программа обеспечения доступа к продовольствию поддерживает создание общественных садов для обеспечения равного доступа к питательной пище с точки зрения ценовой доступности, физической доступности и культурной связи.

ОБ УПРАВЛЕНИИ РАЗВИТИЯ СОСЕДСТВА

Департамент развития микрорайона (DND) отвечает за размещение бездомных бостонцев, развитие доступного жилья и обеспечение того, чтобы арендаторы и домовладельцы могли найти, поддерживать и оставаться в своих домах. В рамках продолжающихся мер по борьбе с коронавирусом Управление жилищной стабильности проводит семинары по правам арендаторов, чтобы информировать жителей о моратории на выселение и их правах. Boston Home Center продолжает оказывать помощь при первоначальном взносе покупателям жилья впервые и ремонтировать дома пожилым людям и жителям с низкими доходами.Отдел поддерживающего жилья работает с различными партнерами по всему городу, чтобы быстро разместить людей, которые испытывают бездомность. Щелкните ссылку, чтобы узнать больше о нашей работе в DND.

О ПАРКЕ И ОТДЕЛЕНИИ ОТДЫХА
Департамент парков и отдыха создает и поддерживает чистые, зеленые, безопасные и доступные общественные парки и открытые пространства по всему Бостону. Департамент отвечает за 217 парков, игровых и спортивных площадок, два поля для гольфа, 65 площадей, 17 фонтанов, 75 игровых площадок, 16 исторических и три действующих кладбища, городские дебри, четыре спортивные поля средней школы и около 125000 деревьев, все покрывающие 2346 акров, 1000 из которых составляют историческое Изумрудное ожерелье.Parks and Recreation также отвечает за более чем 35 000 уличных деревьев.

###

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie.Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie.Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Гетерометаллический металлцикл Ru – Pt для двухфотонной фотодинамической терапии

Нековалентные взаимодействия широко используются в природных системах для создания сложных и функциональных биомолекул, выполняющих различные биологические процессы. Вдохновленные природой, химики используют дативные связи металл-лиганд между основными органическими донорами Льюиса и кислыми акцепторами металлов Льюиса для управления организацией молекулярных предшественников. Благодаря хорошей направленности и обратимости координационного взаимодействия металл-лиганд, различные дискретные супрамолекулярные координационные комплексы (SCC) с четко определенными размерами и формой были рационально разработаны и синтезированы с высокой эффективностью посредством самосборки, управляемой координацией (1–3 ).Новые функциональные возможности, которые не наблюдаются у отдельного предшественника, могут возникать в результате образования систем SCC. Например, SCC могут вмещать гостевые молекулы (4⇓ – 6) или катализировать реакции (7, 8) за счет образования больших внутренних полостей. Высокоэмиссионные SCC могут быть получены путем ограничения внутримолекулярных движений флуорофоров с характером эмиссии, индуцированной агрегацией, в жестком каркасе (9). Макроциклическая структура SCC может увеличивать их клеточное поглощение по сравнению с их соответствующими низкомолекулярными предшественниками и позволяет связываться с биомолекулами с высоким сродством (10–12).

Фотодинамическая терапия (ФДТ) — это медицинская процедура, которая требует сочетания фотосенсибилизатора и света в насыщенной кислородом среде (13, 14). Активные формы кислорода (АФК) образуются в результате передачи энергии возбужденного состояния от фотосенсибилизатора, возбужденного светом, к кислороду и другим молекулам в ткани, что вызывает повреждение клеток и тканей. ФДТ может вызывать локальное повреждение злокачественных тканей за счет местного воздействия света, что приводит к значительному снижению побочных эффектов для здоровых тканей по сравнению с традиционной химиотерапией и лучевой терапией. В результате в последние годы ФДТ была принята для лечения ряда видов рака, инфекций и кожных заболеваний (13, 14). Комплексы Ru (II) представляют собой развивающийся класс фотосенсибилизаторов, обладающих хорошей растворимостью в воде, хорошей фотостабильностью и легкой способностью к синтетической перестройке (14, 15). Кроме того, некоторые полипиридильные комплексы Ru (II) проявляют свойства двухфотонного поглощения (ДФП) (14⇓ – 16). По сравнению с однофотонными фотосенсибилизаторами, двухфотонные фотосенсибилизаторы обеспечивают смещенные в красную область длины волн с меньшей энергией для терапевтической активации, что приводит к меньшему повреждению здоровых тканей, повышению пространственного разрешения и значительному увеличению глубины проникновения (14, 15).В последние годы значительные усилия были направлены на модификацию вспомогательных лигандов для получения полипиридильных комплексов Ru (II) с желаемыми фотофизическими и биологическими свойствами для ФДТ (стабильность, клеточное поглощение, субклеточное распределение и токсичность) (14, 15, 17, 18).

Сочетая привлекательные свойства полипиридильных комплексов Ru (II) с универсальностью самосборки, управляемой координацией, мы разработали гетерометаллический металлоцикл Ru – Pt в качестве двухфотонного агента PDT. Включение полипиридильного комплекса Ru (II) в SCC на основе Pt (II) привело бы к нескольким улучшениям.Во-первых, Pt (II) может наделить ансамбль благоприятными фотофизическими свойствами для биомедицинских приложений, такими как излучение с красным смещением и повышенная активность TPA по сравнению с аналогичными небольшими молекулами (19, 20). Во-вторых, как тяжелый атом, Pt также будет способствовать межсистемному пересечению, что приводит к более эффективной генерации АФК (21, 22). В-третьих, жесткая плоская макроциклическая структура 1 может быть полезной для увеличения поведения TPA из-за усиленной вызванной деформацией поляризации заряда полипиридилового донора Ru (II) 2 (23).Наконец, высокозаряженная природа образовавшегося SCC может способствовать его интернализации (10) и избирательному накоплению в субклеточных органеллах, гиперчувствительных к PDT-опосредованному повреждению, таких как митохондрии (16, 24) и ядра (25). На основе этой конструкции был синтезирован гетерометаллический Ru-Pt-металлоцикл 1 посредством координационно-управляемой самосборки между полипиридильным донором Ru (II) 2 и декорированным тетраметиламмонием акцептором Pt (II) 3 , как показано на рис.1. Мы исследовали фотофизические свойства, квантовый выход синглетного кислорода, клеточное поглощение и внутриклеточную локализацию 1 . Затем были проведены исследования in vitro и in vivo эффективности двухфотонной ФДТ, которые продемонстрировали, что 1 является сильнодействующим агентом двухфотонной ФДТ с небольшими побочными эффектами.

Результаты и обсуждение

Синтез и характеристика металлацикла.

Синтез гетерометаллического металлоцикла Ru – Pt 1 представлен на рис.1. Смешивание эквимолярных количеств Ru (II) 4,4 ‘: 2’, 2 ″: 4 ″, 4 ‴ -кватерпиридинового (qpy) комплекса 2 и бис (фосфин) акцептора Pt (II) 3 привело к образование [2 + 2] металлоцикла. Затем проводили противоионный обмен, добавляя к реакционной смеси насыщенный раствор нитрата тетраметиламмония в дихлорметане, с получением 1 в виде твердого вещества темно-красного цвета. Продукт 1 охарактеризован с помощью многоядерного ЯМР ( ¹ H, ³¹ P) и времяпролетной масс-спектрометрии с ионизацией электрораспылением.Спектр ЯМР ³¹ P { ¹ H} для 1 показывает острый синглет при 13,38 м.д. с сопутствующими сателлитами ¹⁹⁵ Pt ( ¹ J _Pt-P = 2647,5 Гц) ( SI Приложение , рис. S14), свидетельствующее об образовании дискретного высокосимметричного металлоцикла. В масс-спектре 1 наблюдаются три пика, соответствующие неповрежденному металлуциклу с потерей нитрат-анионов при m / z = 1,301.28, 960,36 и 756,05, что соответствует [ 1 −3NO ₃ ] ³⁺ , [ 1 −4NO ₃ ] ⁴⁺ и [ 1 −5NO ₃ ] ⁵⁺ соответственно ( SI Приложение , рис. S15). Пики были изотопно разрешены и хорошо согласуются с теоретическими распределениями, которые подтверждают стехиометрию образования 1 .

Фотофизические свойства металлоцикла.

Электронные спектры поглощения и излучения металлоцикла 1 зарегистрированы в недеоксигенированном водном растворе (рис.2 A и SI Приложение , рис. S16). Несколько полос поглощения наблюдаются в УФ-видимой (УФ-видимой) области. Сильная полоса поглощения с центром при 488 нм приписывается переходу с переносом заряда d (RuII) → π * (qpy) металл-лиганд (14, 15). Спектры излучения 1 демонстрируют неструктурированную полосу с центром на 696 нм, которая сдвинута в красную область по сравнению с донором 2 ( SI Приложение , рис. S17) на 30 нм из-за стабилизации π * орбиталей. лиганда qpy при комплексообразовании с акцептором Pt (II) (19).Подобно другим полипиридильным комплексам Ru (II) (15), большой стоксов сдвиг 208 нм наблюдается для 1 . Установлено, что квантовый выход люминесценции 1 составляет 2,8% в аэрированном растворе метанола, а время жизни люминесценции для 1 составляет 319 нс, что указывает на фосфоресцентную природу излучения. Эти два значения сопоставимы с другими полипиридильными комплексами Ru (II) (14, 15). Излучение в ближнем инфракрасном диапазоне и длительное время жизни люминесценции 1 позволяют легко охарактеризовать его клеточное поглощение и внутриклеточные свойства распределения с меньшим повреждением здоровых тканей, меньшими помехами рассеяния и низким фоном автофлуоресценции.

Фотофизические свойства металлоцикла 1 . ( A ) Спектр излучения 1 . ( B ) Сечения двухфотонного поглощения 1 при различных длинах волн возбуждения от 780 до 880 нм.

Эффективность TPA для 1 количественно определяется поперечным сечением TPA (σ ₂ ), которое было измерено в метаноле от 780 до 880 нм с интервалами 10 нм. Результаты показаны на рис. 2 B . Было обнаружено, что наибольшее поперечное сечение TPA составляет около 800 нм со значением σ ₂ , равным 1371 GM.Это значение намного выше, чем [Ru (bpy) ₃ ] ²⁺ (σ ₂ = 66 GM) и свободного донора 2 (σ ₂ = 83 GM) (20), а также тетрафенилпорфирин (σ ₂ = 2,2 GM) (26), клинический фотосенсибилизатор и многие двухфотонные биоактивные металлоорганические соединения, о которых недавно сообщалось (14, 15, 23, 27). Увеличение активности ТФК связывают с расширением молекулярной орбитали донора Ru (II) 2 на металлический центр Pt при самосборке (19, 20) и ригидностью донора Ru (II) 2 при формирование макроциклической структуры, усиливающей ее поляризацию (23).Используя длину волны возбуждения 800 нм, был зарегистрирован индуцированный двумя фотонами спектр излучения 1 , который показал характеристики, аналогичные линейным спектрам ( SI Приложение , рис. S18). Интенсивность индуцированной двумя фотонами люминесценции 1 демонстрирует квадратичную зависимость от мощности возбуждения, как показано логарифмической цифрой в SI Приложение , Рис. S18, Вставка . Наклон логарифмического графика составляет ∼2, что подтверждает, что металлоцикл 1 является двухфотонно-активным.

Фотостабильность 1 исследовали путем мониторинга спектра поглощения его водного раствора в УФ-видимой области при непрерывном облучении светом в течение 20 мин. Никаких значительных изменений в абсорбционных свойствах 1 на протяжении всего эксперимента не наблюдалось ( SI Приложение , рис. S19), что указывает на превосходную фотостабильность.

Синглетный кислород (

Спектроскопия электронного парамагнитного резонанса (ЭПР) была использована для исследования типа АФК, производимых 1 при облучении светом; 2,2,6,6-тетраметилпиперидин и 5,5-диметил-1-пирролин N -оксид использовали для обнаружения образования синглетного кислорода ( ¹ O ₂ ) и радикала · OH соответственно. Характерный триплетный сигнал, индуцированный ¹ O ₂ , наблюдался в спектре ЭПР при облучении светом 450 нм ( SI Приложение , рис. S20). Интенсивность сигнала увеличивалась при постоянном освещении. Напротив, не было обнаружено сигналов, соответствующих образованию радикала · ОН. Это исследование подтверждает, что 1 генерирует ¹ O ₂ при световом облучении, аналогично многим клинически применяемым агентам PDT.

Квантовый выход ¹ O ₂ (Φ _Δ ) является ключевым параметром для оценки способности фотосенсибилизатора генерировать ¹ O ₂ .Φ _Δ для 1 оценивали путем прямого измерения люминесценции ¹ O ₂ при 1270 нм после фотовозбуждения и сравнивали с [Ru (bpy) ₃ ] ²⁺ (Φ _Δ = 81%) ( SI Приложение , рис. S21). Было определено, что Φ _Δ для 1 составляет 89%. Также был проведен непрямой анализ Φ _Δ с использованием 1,3-дифенилизобензофурана (DPBF) в качестве поглотителя ¹ O ₂ (28). DPBF обладает сильной полосой поглощения с центром при 418 нм.Как показано в приложении SI, приложение , рис. S22, для смешанного раствора 1 и DPBF интенсивность полосы поглощения с центром на 418 нм постоянно уменьшается при длительном облучении светом, что указывает на ¹ O ₂ образование путем возбуждения 1 , который разлагает DPBF. Φ _Δ для 1 было рассчитано как 88% с использованием [Ru (bpy) ₃ ] ²⁺ в качестве эталона. Этот результат хорошо согласуется с прямым методом.Φ _Δ для 1 значительно выше, чем у многих органических и металлоорганических соединений, включая [Ru (bpy) ₃ ] ²⁺ (14, 15, 27), предположительно из-за усиленного процесса межсистемного пересечения путем введения Pt (21, 22). Способность молекул инициировать процесс ФДТ после двухфотонного возбуждения часто оценивают с помощью параметра качества σ ₂ × Φ _Δ (29). Значение σ ₂ × Φ _Δ 1,220 GM в 1 намного больше, чем у тетрафенилпорфирина (1.5 GM) (29), показывая, что 1 является высокоэффективным двухфотонным сенсибилизатором ¹ O ₂ .

Клеточное поглощение, локализация и визуализация.

Стабильность комплекса 1 в водной среде оценивали путем мониторинга спектра поглощения УФ-видимой области в кислых (pH = 5) и физиологических (pH = 7,4) условиях ( SI Приложение , рис. S23). В обоих условиях наблюдалось снижение поглощения менее чем на 5% через 24 часа, что позволяет предположить, что 1 имеет хорошую стабильность.

Липофильность / гидрофильность соединения может значительно влиять на его клеточное поглощение и накопление (24, 30). Коэффициент разделения октанол / вода (log P _{o / w} ) для 1 был определен как -0,45, менее гидрофильным, чем [Ru (bpy) ₃ ] ²⁺ (log P _{). o / w} = -1,26) ( SI Приложение , рис. S24) из-за использования гидрофобного строительного блока бис (фосфин) Pt (II). Более низкая гидрофильность 1 может способствовать его эффективности поглощения клетками и его селективной локализации.

Клеточную локализацию металлацикла 1 исследовали с помощью конфокальной лазерной сканирующей микроскопии на клеточной линии карциномы легких человека A549. Как показано на рис. 3, 1 могут проникать в клетки и демонстрировать сильную темно-красную внутриклеточную люминесценцию при однофотонном возбуждении. Исследования колокализации 1 с коммерческим красителем лизосом LysoTracker Green (LTG), ядерным красителем Hoechst 33342 (Hoechst) и митохондриальным красителем MitoTracker Deep Red (MTDR) были выполнены на клетках A549 (рис.3). Сигнал люминесценции 1 показал хорошую картину наложения с MTDR с коэффициентом корреляции 0,80, в то время как меньшее количество 1 перекрывается с Hoechst, что приводит к более низкому коэффициенту корреляции 0,33. Был обнаружен слабый коэффициент корреляции для LTG. Этот результат указывает на то, что 1 селективно локализуется в митохондриях и ядрах.

Колокализационные изображения 1 с LTG, Hoechst и MTDR с соответствующими коэффициентами корреляции.(Масштаб: 20 мкм.)

Поглощение клетками и биораспределение 1 дополнительно определяли количественно с использованием анализа МС с индуктивно связанной плазмой (ICP-MS). Зависимые от времени исследования ICP-MS показали, что общее поглощение клетками 1 достигло максимума через 12 часов инкубации с концентрацией 114,82 нг и 451,37 нг на миллион клеток для Ru и Pt, соответственно ( SI Приложение , Рис. S25 A ). Для предшественника 2 в тех же условиях максимальная концентрация Ru в клетках зафиксирована на уровне 2.32 нг на миллион клеток ( SI Приложение , рис. S26 A ), предполагая, что макроциклическая сборка 1 имеет более благоприятные свойства клеточного поглощения по сравнению с его низкомолекулярным предшественником 2 . Что касается субклеточного распределения 1 , 67% содержания как Ru, так и Pt было обнаружено в митохондриях, тогда как меньшая часть попала в ядра, где 25% внутриклеточного Ru и Pt были обнаружены после инкубации с 1 для 2 ч в темноте (5 мкМ) (таблица 1).Примечательно, что было вычислено, что молярное соотношение Ru: Pt составляет ~ 1: 2 в клетках и внутри различных органелл на протяжении экспериментов на 1 , что соответствует его стехиометрии. Благодаря отчетливому поведению клеточного поглощения и субклеточного распределения 1 и предшественников ( SI Приложение , Рис. S25 – S27), эти результаты подтверждают поглощение и локализацию 1 как интактного металлацикла.

Количественное определение интернализованных Ru и Pt с помощью ИСП-МС клетками A549, инкубированными с 1 в течение 2 часов

Субклеточное распределение является важным фактором, определяющим эффективность агента PDT из-за короткого срока службы и ограниченного диапазона диффузии ROS (31).Предыдущие исследования показали, что липофильные заряженные комплексы металлов могут накапливаться в митохондриях из-за отрицательной разности потенциалов на митохондриальной мембране (16, 24, 28). Введение декорированного тетраметиламмонием акцептора Pt (II) 3 наделяет металлоцикл зарядом +10 и повышенной липофильностью по сравнению с низкомолекулярными полипиридильными соединениями Ru (II), что может приводить к накоплению в митохондриях. Митохондрии являются важными регуляторами внутреннего пути апоптоза и множественных форм неапоптотической гибели клеток (16).Повышенные уровни внутриклеточных АФК в митохондриях могут запускать активацию каспаз и апоптоз (32). Кроме того, лекарственные препараты, нацеленные на митохондрии, нарушают окислительно-восстановительные функции митохондрий и могут вызывать митохондриально-зависимый сигнальный путь гибели клеток (16). Следовательно, накопление 1 в митохондриях благоприятно для его применения в качестве агента ФДТ. Помимо митохондрий, 1 также частично накапливаются в ядре, предположительно из-за его большой планарной структуры и общего положительного заряда, который облегчает его взаимодействие с ДНК (33).Ядро также является эффективной субклеточной мишенью для лечения ФДТ, поскольку продуцируемые в ядре АФК могут напрямую повреждать внутриядерную ДНК и ингибировать процессы репарации ДНК (25, 34). Кроме того, АФК, образующиеся в митохондриях и ядре, вызывают повреждение клеток различными путями, что может давать синергетический эффект, тем самым реализуя более эффективный режим лечения ФДТ. Двойной режим действия 1 также может минимизировать потенциальное сопротивление PDT (35).

Чтобы определить механизм интернализации 1 , исследования клеточного поглощения были проведены при пониженной температуре или в присутствии метаболических и эндоцитарных ингибиторов ( SI Приложение , рис.S28). Энергетическая зависимость поглощения клетками 1 была подтверждена резким снижением поглощения 1 клетками A549 при более низкой температуре или предварительно обработанных метаболическими ингибиторами 2-дезокси-d-глюкозой и олигомицином. Инкубация клеток с триэтиламином, ингибитором переносчика органических катионов, не влияла на интернализацию 1 , что позволяет предположить, что поглощение 1 не зависит от активного транспорта. Предварительная обработка эндоцитарным ингибитором NH ₄ Cl приводила к снижению интенсивности внутриклеточной люминесценции по сравнению с контролем, что указывает на то, что 1 интернализируется в раковые клетки посредством энергозависимого пути эндоцитоза.

Индуцированное фотовозбуждением

Цитотоксичность 1 в темноте исследовали на различных линиях раковых клеток, включая HeLa, линию клеток легочной карциномы человека A549, устойчивую к цисплатину клеточную линию A549R, линию клеток KV карциномы дна полости рта человека с множественной лекарственной устойчивостью и клеточную линию предстательной железы человека. линия раковых клеток PC-3 с использованием анализа 3- (4 ‘, 5′-диметилтиазол-2’-ил) -2,5-дифенилтетразолийбромида. 1 оказался слаботоксичным по отношению к клеточным линиям со значением IC ₅₀ , равным 65.2–80,9 мкМ ( SI Приложение , таблица S1) в темноте. При воздействии света (450 нм, 21,8 мВт / см ² , 5 мин) 1 оказал значительное влияние на жизнеспособность клеток со значениями IC ₅₀ 0,71–4,4 мкМ ( SI Приложение , Таблица S1) , в результате индекс фотоцитотоксичности (PI) [PI = IC _{50 (темный)} / IC _{50 (светлый)} ] составил 11,6–114 (Таблица 2). Среди выбранных линий клеток клетки A549 показали самое низкое значение IC ₅₀ 0,71 мкМ и 114-кратное повышение цитотоксичности при облучении.В результате клетки A549 были использованы в качестве модельной клеточной линии для следующих исследований. Цисплатин использовали в качестве положительного контроля процедуры, и его значения PI оказались равными ~ 1 для всех линий клеток из-за его низкой фотосенсибилизирующей активности. Примечательно, что при тех же условиях 1 продемонстрировал значительно более высокие значения фотоцитотоксичности и PI на всех выбранных линиях клеток по сравнению с цисплатином, Ru (bpy) ₃ ²⁺ и клинически одобренным агентом PDT 5-аминолевулиновой кислотой (5-ALA ) (Таблица 2).Кроме того, значения PI для 1 сопоставимы или даже лучше, чем у многих полипиридил-фотосенсибилизаторов Ru (II) в сопоставимых экспериментальных условиях (14, 15).

PI для 1, 5-ALA, Ru (bpy) ₃ ²⁺ и цисплатина по отношению к различным линиям раковых клеток

Чтобы продемонстрировать способность 1 генерировать ¹ O ₂ in vitro с двухфотонным облучением, 2,7-дихлородигидрофлуоресцеиндиацетат (DCFH-DA) был использован в качестве внутриклеточного индикатора ROS, который быстро окислялся с образованием высоко флуоресцентного 2 ‘, 7’-дихлорфлуоресцеина в присутствии ROS (36) .Клетки A549 инкубировали с 1 и DCFH-DA и записывали конфокальные флуоресцентные изображения клеток до и после воздействия двухфотонным светом. Как показано в приложении SI, приложение , рис. S29, морфология клеток осталась неизменной, а флуоресценция не наблюдалась до воздействия света, что свидетельствует о низкой цитотоксичности 1 . Заметная зеленая флуоресценция наблюдалась после двухфотонного светового облучения, что указывает на то, что 1 является эффективным двухфотонным фотосенсибилизатором в клетках.Двухфотонный свет, используемый для фотовозбуждения, безопасен для клеток, поскольку клетки, обработанные только DCFH-DA, имели нормальную морфологию и не усиливали флуоресценцию после облучения.

Способность 1 действовать как двухфотонный агент PDT была подтверждена анализом кальцеина AM / гомодимера этидия-1 (EthD-1) ( SI Приложение , рис. S30). Неемиссивный кальцеин AM может быть преобразован в кальцеин, излучающий зеленый цвет, внутриклеточными эстеразами в живых клетках, тогда как EthD-1 может проникать только в клетки с поврежденными мембранами и излучать красную флуоресценцию при связывании с нуклеиновыми кислотами (37).Клетки A549, инкубированные с 1 в темноте, проявляли интенсивную зеленую флуоресценцию, что означает, что большинство раковых клеток были живыми. Затем части клеток подвергали двухфотонному световому облучению, и гибель клеток была обнаружена в облучаемой области, о чем свидетельствует потеря зеленой флуоресценции и появление красной флуоресценции в этой области. Более того, уменьшение клеток, наблюдаемое в облучаемой области, указывает на то, что серьезное повреждение клеток произошло при фотовозбуждении 1 .Для дальнейшей оценки эффективности двухфотонной ФДТ 1 был проведен анализ аннексина V-FITC / пропидия иодида (38) ( SI, приложение , рис. S31). После двухфотонного облучения наблюдались как окрашивание в зеленый цвет (FITC) на поверхности клетки, так и окрашивание в красный цвет (йодид пропидия) по всему ядру, что указывает на некроз или поздний апоптоз клеток.

Механизм гибели клеток при фотовозбуждении 1 был исследован путем измерения активности клеточной каспазы-3/7 с помощью люминесцентного анализа ( SI Приложение , рис.S32). Каспазы-3/7 известны своей центральной ролью в осуществлении апоптоза в клетках млекопитающих (39). В отсутствие света не было обнаружено усиления клеточной активности каспазы-3/7 для клеток, инкубированных с 1 по сравнению с необработанными клетками, в то время как повышенная активность каспазы была обнаружена в клетках, обработанных цисплатином, что согласуется с исследованиями цитотоксичности, которые показывают что 1 обладает слабой токсичностью. При световом облучении клетки, инкубированные с 1 , проявляли значительно более высокую активность каспазы-3/7 по сравнению с необработанными клетками или клетками, обработанными цисплатином, что позволяет предположить, что обработка PDT с помощью 1 эффективно индуцирует клеточный апоптоз.

Поскольку большая часть 1 накапливается в митохондриях, мы исследовали, были ли митохондрии повреждены во время лечения ФДТ. Дисфункцию митохондрий определяли путем измерения изменений потенциала митохондриальной мембраны (ММП) до и после двухфотонного светового облучения 5,5 ‘, 6,6′-тетрахлор-1,1′-3,3’-тетраэтилбензимидазолилкарбоцианином. йодид (JC-1). JC-1 — это митохондриально-селективный краситель, который излучает красную флуоресценцию при высоком уровне ММП и зеленую флуоресценцию при низком уровне ММП (40).Как показано в Приложении SI , рис. S33, клетки, обработанные 1 , показали отчетливое зеленое свечение после светового облучения, что указывает на потерю ММП и, следовательно, на дисфункцию митохондрий по сравнению с необработанной группой, что позволяет предположить, что 1 может вызывать апоптоз клеток. через митохондриально-опосредованные пути.

Влияние двухфотонной PDT на внутриядерную ДНК исследуют с помощью анализа TUNEL. После воздействия двухфотонного светового излучения фрагментация ДНК в ядрах наблюдается для клеток, предварительно обработанных 1 ( SI Приложение , рис.S34), что указывает на то, что фотовозбуждение 1 также приводит к повреждению внутриядерной ДНК.

Двухфотонная ФДТ in Vivo.

Эффективность двухфотонной PDT in vivo для 1 дополнительно оценивали с использованием голых мышей с опухолью A549 с объемом опухоли ксенотрансплантата 80 мм ³ . Перед экспериментами (день 0) мышей случайным образом разделили на четыре группы (по пять мышей в группе): физиологический раствор в качестве контроля (группа 1), физиологический раствор и двухфотонное лазерное облучение (группа 2), 1 только с инъекцией. (группа 3) и 1 — инжектированные и подвергнутые двухфотонному лазерному облучению (группа 4).Мышам в группе 4 внутриопухолево вводили металлоцикл 1 (0,5 мг / кг массы тела). Через два часа после инъекции опухоль A549 была облучена диодным лазером (800 нм, 50 мВт, 20 с / мм). Та же самая доза лазера и та же доза 1 использовались в группах 2 и 3. На 7 день мышей в группах 2 и 4 подвергали второму курсу светового облучения с той же самой дозой света, которая использовалась ранее. Объем опухоли и массу тела мышей из каждой группы измеряли ежедневно в течение 14 дней.Как показано на рис. 4 A , для экспериментальной группы опухоли уменьшались постепенно и уменьшились до 78% от первоначального размера на 14 день, в то время как опухоли в других группах показали более чем 13-кратный рост по сравнению с тем же. период. В процессе лечения не было обнаружено заметной потери массы тела (рис. 4 B ), что указывает на низкий уровень побочных эффектов лечения. После лечения ФДТ было проведено гистологическое исследование опухолей с использованием окрашивания H&E. Опухолевые ткани из группы 4 показали необратимые патологические изменения и деградацию, что свидетельствует о некрозе или апоптозе опухолевых клеток, тогда как опухолевые ткани из других групп состояли из нормальных, плотно упакованных опухолевых клеток (рис.4 D ). Системную токсичность лечения дополнительно исследовали путем изучения гистологии органов, включая печень, почки, селезенку, сердце, легкие, мозг, кишечник и яичник, с использованием окрашивания H&E ( SI, приложение , рис. S35). Не удалось обнаружить ни необратимых патологических изменений, ни повреждений органов мышей всех четырех групп, что свидетельствует о низкой системной токсичности 1 . Следовательно, металацикл 1 подходит для лечения рака in vivo PDT с высокой эффективностью и незначительной токсичностью для здоровых органов обработанных мышей.

Двухфотонная ФДТ in vivo. Мышей случайным образом распределили на четыре различных режима лечения: ( i ) физиологический раствор (контроль), ( ii ) физиологический раствор и двухфотонное лазерное облучение (свет), ( iii ) 1 — только инъекция ( 1 ) и ( iv ) 1 -инжектировали и подвергали двухфотонному лазерному облучению ( 1 + свет). ( A ) Кривые ингибирования роста опухоли in vivo для мышей при четырех различных обработках.( B ) Средняя масса тела мышей с опухолью при четырех различных обработках. ( C ) Репрезентативные фотографии опухолей A549 у мышей с четырьмя различными видами лечения. ( D ) Гистологическое исследование опухолей с четырьмя обработками после ФДТ. (Масштаб: 50 мкм.)

Начни бизнес, развивай свой бизнес

• Начать
  • Начать свой бизнес
  • Брендинг

    Выглядите профессионально и помогите клиентам соединиться с вашим бизнесом

  • Присутствие в Интернете

    Найдите домен, изучите стоковые изображения и увеличьте свой бренд

  • Настройка магазина

    Используйте мощные функции Shopify для начала продаж

• Продать
  • Продать повсюду
  • Интернет-магазин

    Продать через Интернет через веб-сайт электронной коммерции

  • Торговая точка

    Продать в розничных точках, всплывающих окнах и за их пределами

  • Кнопка покупки

    Преобразовать с существующего веб-сайта или блога в интернет-магазин

  • Касса

    Обеспечьте быструю и удобную оплату

  • Каналы продаж

    Охват миллионов покупателей и увеличение продаж

  • Индивидуальные инструменты витрины

    Выделитесь с индивидуальной торговлей

• Начать
  • Начать свой бизнес
  • Брендинг

    Выглядите профессионально и помогите клиентам связаться с вашим бизнесом

  • Присутствие в Интернете

    Найдите домен, изучите стоковые изображения и увеличьте свой бренд

  • Настройка магазина

    Используйте мощные функции Shopify для начала продаж

• Продать
  • Продать повсюду
  • Интернет-магазин

    Продать через Интернет через веб-сайт электронной коммерции

  • Торговая точка

    Продать в розничных точках, всплывающих окнах и за их пределами

  • Кнопка покупки

    Преобразование с существующего веб-сайта или блога в интернет-магазин

  • Касса

    Обеспечьте быструю и удобную оплату

  • Каналы продаж

    Охват миллионов покупателей и увеличение продаж

  • Индивидуальные инструменты витрины

    Выделитесь с индивидуальной торговлей

• Рынок
• Управление

Открывается в новом окне Открывает внешний сайт Открывает внешний сайт в новом окне

Попробуйте Shopify бесплатно в течение 14 дней, кредитная карта не требуется.Введя свой адрес электронной почты, вы соглашаетесь получать маркетинговые электронные письма от Shopify.

Сделайте свой бизнес онлайн

Создайте веб-сайт электронной торговли с мощными инструментами, которые помогут вам находить клиентов, стимулировать продажи и управлять повседневными делами.

Лучшим путем вперед

Начать бизнес в Интернете

Создайте бизнес независимо от того, есть ли у вас свежая идея или вы ищете новый способ заработка.

Переведите свой бизнес в онлайн

Превратите свой розничный магазин в интернет-магазин и продолжайте обслуживать клиентов, не теряя ни секунды.

Перейти на Shopify

Разместите свой бизнес на Shopify независимо от того, какую платформу электронной коммерции вы используете в настоящее время.

Нанять Shopify эксперт

Настройтесь с помощью надежного фрилансера или агентства из Shopify Experts Marketplace.

С вами куда угодно

Единая платформа со всеми функциями электронной коммерции и точек продаж. нужно начать, запустить и развивать свой бизнес.

Видео загружается

Видео загружается

Продавать везде

Используйте одну платформу для продажи продуктов кому угодно и где угодно — лично в торговой точке или онлайн через свой веб-сайт, социальные сети и онлайн-магазины.

Продвигайте свой бизнес

Избавьтесь от догадок в маркетинге с помощью встроенных инструментов, которые помогут вам создавать, проводить и анализировать кампании цифрового маркетинга.

218 долларов

Транзакции

# 1009

150 долларов

# 1010

160 долларов

# 1011

80,00 долларов

# 1012

120 долларов

# 1013 800003

Расширение прав и возможностей независимых владельцев бизнеса во всем мире

Более 1700000 предприятий в 175 странах по всему миру заработали более 200 миллиардов долларов США продаж с помощью Shopify.

Моделирование мировых продаж

На медленно вращающемся глобусе видны зеленые дуги, перемещающиеся от одной стороны земли к другой.Он иллюстрирует международную сеть продавцов и клиентов Shopify.

Приостановить анимацию глобуса

Возобновить анимацию глобуса

«За 3 года мы смогли построить что-то, что многие бренды фактически не смогли этого сделать за 10 лет ».

Chioma | Шкаф Cee Cee’s NYC

Воспроизвести историю Чиомы и Ученны

Бренды, использующие Shopify

Получите необходимую помощь на каждом этапе пути

Поддержка Shopify

Обращайтесь в службу поддержки 24/7, если вы решаете проблемы или ищете бизнес-совет.

Обратиться в службу поддержки

Магазин приложений Shopify

Добавьте возможности и функциональность в свой бизнес с помощью более 6000 приложений, которые напрямую интегрируются с Shopify.

Посетите магазин приложений Shopify

Дополнительные ресурсы

Правдивая история имени Google: BackRub

RANDI LYNN BEACH / AP Images Соучредители Google Ларри Пейдж и Сергей Брин определенно поклонники игры слов, и, похоже, им нравятся названия компаний, которые одновременно и дурацкие, и значимые.

Прекрасным примером этого является запуск Google в начале этого лета своей новой операционной структуры Alphabet. Пейдж объяснил название в сообщении блога, наполненном восклицаниями:

«Нам понравилось название Alphabet, потому что оно означает набор букв, обозначающих язык, одно из самых важных нововведений человечества и является основой того, как мы индексируем с помощью поиска Google! Нам также нравится, что оно означает альфа-бет (Alpha — это инвестиции возврат выше отметки), к которой мы стремимся! »

Но это определенно не первый раз, когда дуэт экспериментировал с языком.Еще в 1996 году, еще до того, как Google существовал как единое целое, Пейдж и Брин уже придумывали занудные имена для поисковых систем.

По словам Дэвида Коллера из Стэнфорда и собственного веб-сайта Google, набег Пейджа и Брина в мир поисковых систем в 1996 году первоначально назывался BackRub.

Да, BackRub.

Они назвали это так, потому что программа анализировала «обратные ссылки» в Интернете, чтобы понять, насколько важен веб-сайт и к каким другим сайтам он относится. BackRub работал на серверах Стэнфорда, пока в конечном итоге не стал использовать слишком большую полосу пропускания.

Но к 1997 году Пейдж, похоже, решил, что имя BackRub недостаточно хорошее. По словам Коллера, Пейдж и его коллеги по офису в Стэнфорде начали придумывать разные названия для технологии поисковых систем, названия, которые напоминали бы, сколько данных они индексировали.

Название «Google» на самом деле произошло от аспиранта Стэнфорда по имени Шон Андерсон, пишет Коллер. Андерсон предложил слово «гуголплекс» во время мозгового штурма, а Пейдж ответил более коротким словом «гугол».«Гугол» — это цифра 1, за которой следуют 100 нулей, а гуголплекс — это 1, за которой следуют нули гугол.

Андерсон проверил, не было ли занято это доменное имя, но случайно искал «google.com» вместо «googol.com». Пейджу понравилось это имя еще больше, и он зарегистрировал доменное имя для себя и Брина 15 сентября 1997 года.

От BackRub до Google и Alphabet — заставляет задуматься, что же дальше.

K-Drama: Тэ Ян, Ру Ри намереваются найти злодея в фильме «Человек, который накрывает стол»

Махало за поддержку звездного рекламодателя Гонолулу.Наслаждайтесь этой бесплатной историей!

Краткие итоги этой недели

«Человек, который накрывает на стол»

Эпизод 39

18:40 сегодня

Тэ Ян выясняет настоящего виновника покушения на убийство Кевина. Тэ Ян и Ру Ри отправились на поиски злодея. Пак убеждает Эй Ри, что они должны работать вместе, чтобы заполучить деньги.

Эпизод 40

19:45 сегодня

Когда Со Вон, Ён Джу и Хан Гёль наконец обретают покой, появляется Су Джи, чтобы создать рябь.Тэ Ян и Ру Ри горячо преследуют виновника, но им приходится нелегко.

«Йи Санг»

(специальный драматический)

19:45 Понедельник

Когда портрет писателя И Сана появляется в галерее, он становится порталом в историю. Картина переносит зрителей в прошлое, когда И Сан и его друзья отправляются в поисках сокровищ.

«Racket Boys»

Эпизод 1

19:45 Вторник

Команда сельской школы по бадминтону изо всех сил пытается заявить о себе.Четыре мальчика объединяются, когда они объединяются в одну команду, преодолевая препятствия на своем пути. Хён Чжон и его семья уезжают из Сеула в Хэнам. Следуйте за семьей, когда они строят свой новый дом в самой южной части полуострова Южная Корея.

«Феникс 2020»

Эпизоды 81-82

19:45 Среда

Планы Со Ын Чжу продолжаются, поскольку отношения между Чжи Ын и Чон Мин подвергаются испытанию. Непонимание пары только усиливается, когда Со Ын Чжу пытается разлучить их, притворяясь идеальным помощником Чон Мин.